Wnt5a/Ca2+途径抑制毛囊干细胞分化的调控机制研究

经典Wnt途径促进毛囊干细胞分化的调控作用已得到公认，但不同Wnt之间作用差异很大。我们前期筛选出Wnt5a能抑制毛囊生长，并且Wnt5a在毛囊干细胞中有特异表达，结合组织基因芯片筛选结果，我们推测Wnt5a通过激活Ca2+途径，拮抗经典Wnt/β-catenin信号，从而抑制毛囊干细胞分化，导致抑毛。本项目拟在原代培养毛囊干细胞水平，首先采用过表达和RNAi沉默，证明Wnt5a抑制毛囊干细胞分化；然后使用Ca2+通路特异阻断剂，并借助western blot、激酶活性检测等技术，证实Wnt5a激活Ca2+途径、抑制Wnt/β-catenin途径；最后通过移植实验在体水平验证抑毛。本研究初步揭示了Wnt5a抑制毛囊干细胞分化的调控机制，为深入研究Wnt信号对毛囊干细胞激活、毛囊发育、再生等过程的调控提供创新理论，为体内其他成体干细胞的信号研究提供指导，也有望为毛囊肿瘤的治疗提供新的靶点。

按原计划进行研究，证实了非经典Wnt成员Wnt5a显著抑制小鼠毛囊干细胞分化，其机制是通过激活PKC信号，并拮抗经典Wnt/β-catenin通路，从而Wnt5a的负向调控作用能与激活信号共同平衡毛囊的生长。具体内容如下：1. 成功建立小鼠毛囊干细胞与毛乳头细胞的共培养体系；采用FACS法分选获得原代小鼠毛囊干细胞，利用transwell建立与毛乳头细胞的共培养细胞体系。体视显微镜下分离获得毛乳头细胞，并经特殊染色鉴定。2. 构建Wn5a表达质粒、干扰质粒，并包装为腺病毒。通过稳转Wnt5a质粒，筛选到DP-Wnt5a。3. 探讨Wnt5a对毛囊干细胞分化的影响及机制：通过形态学和分子生物学实验，观察到Wnt5a抑制了毛囊干细胞分化，检测到下游PKC信号的激活，且同时有经典Wnt信号的缺失。此结果通过过表达和沉默方式得到验证。4. 在体动物实验证实Wnt5a的抑制分化效应。5. 此外还增加了额外相关内容的初步研究，包括：（1）Wnt5a对毛囊干细胞增殖的影响；（2）Wnt5a对原代毛乳头细胞活性的影响；（3）Wnt5a在皮肤疾病（银屑病）发病过程中的作用。. 在成果方面，依托本课题，课题组已发表注基金号的中文核心期刊文章2篇；主要实验结果有待SCI整理及专利申请。