DHEA对小鼠氧化应激子宫内膜细胞容受性及其相关蛋白表达的影响

Uncontrolled endometrial oxidative stress and chronic inflammation are the common pathological processes for repeated embryo implantation failure, spontaneous abortion and infertility. However, the unsuccessful reception of embryo by the endometrial membrane can not be fully explained by the effects of known classical reactive oxygen species (ROS) and inflammatory cytokines, implying that other unrevealed protein molecular signal pathways may also have been involved in this complicated process. In the past decades, the negative effect of androgen has been highlighting in infertility and it was once neglected. However, recently, a line of evidence have showed that dehydroepiandrosterone (DHEA), a typical androgen with considerable antioxidant capacity, has not only participated in the implantation of embryo but also tightly related to the endometrial decidualization, leaving unclear mechanisms behind. This has limited its administration clinically due to unpredictable side effects. In the current project, using proteomic analysis, we are planning to explore the possible expressing difference of relevant proteins on an in vitro mouse model of oxidative stressed endometrial cells co-cultured with embryos under the exposure of DHEA, expecting to give insights into the possible underlying molecular mechanisms of the endometrial receptivity and to provide research data and new clues for the treatment of infertility.

失控的子宫内膜氧化应激和慢性炎症是反复胚胎移植失败、自然流产和不孕的共同病理环节。然而，已知的氧自由基（ROS）和炎性介质的作用并不能完全解释所有的胚胎和子宫内膜之间的容受失败。显然，尚有其他未知的蛋白分子信号途径参与了这个复杂的生理过程。一直以来，雄激素在不孕中的作用大多被认为是以负面为主而一度被忽视。然而，近年的研究发现，脱氢表雄酮（DHEA）作为一种有抗氧化活性的雄激素，不仅参与胚胎着床，而且与子宫内膜的蜕膜化过程紧密相关，但具体的机制并不明确，致使其某些临床应用缺乏足够的依据并可能留下未知的隐患。本项目拟使用DHEA干预体外共培养的小鼠胚胎+子宫内膜细胞氧化应激模型，通过蛋白组学分析，比较DHEA干预组和非干预组之间的相关蛋白表达差异，旨在探讨子宫内膜容受性形成可能的分子机制，为临床不孕症的治疗提供实验依据及新的线索。

氧化应激对胚胎植入的影响备受关注，过度的氧化应激不仅不利于胚胎的生长和发育，也可能造成子宫内膜容受性下降，不利于胚胎着床。而具有抗氧化作用的雄激素类激素硫酸脱氢表雄酮（DHEA）在临床上的应用备受争议，其对子宫内膜容受性的调节机制尚不清楚。. 本研究首先采用循证医学的方法，对DHEA在卵巢储备功低下（DOR）患者的应用进行荟萃分析，结果显示：DOR患者予DHEA预治疗后，临床妊娠率显著高于对照组，差异具有统计学意义（OR=1.47, 95%CI: 1.09-1.99）。结论：DHEA补充治疗有可能改善DOR患者妊娠结局。. 基础研究部分：用酶解联合筛网过滤及差时贴壁方法分离培养原代小鼠子宫内膜基质细胞（ESCs），用过氧化氢（H2O2）刺激方法构建蜕膜化氧化应激模型，并在此基础上进一步探讨低浓度DHEA对氧化应激子宫内膜容受性的影响及相关机制。结果显示：该方法可以有效的分离培养了高纯度的原代小鼠子宫内膜基质细胞；该法可以成功构建蜕膜化氧化应激模型；DHEA浓度为1×10-9-1×10-5M 时对细胞的增殖无明显影响，但10 nM或100 nM 的DHEA可显著降低100 μmol/L H2O2诱导蜕膜化小鼠ESCs内活性氧（ROS）的产生。1-100 nM 的DHEA对蜕膜化小鼠ESCs内dPRP mRNA的表达无明显影响。但100nM DHEA能显著增加蜕膜化小鼠ESCs内HOXA10 mRNA及蛋白的表达，差异具有统计学意义（P＜0.01）；氟他胺（FLU）能抑制DHEA诱导的HOXA10 mRNA及蛋白表达的增加，并不能使其降至对照组水平。DHEA或FLU对蜕膜化小鼠ESCs内AR mRNA或蛋白的表达均无明显影响。结论：低浓度DHEA能提高蜕膜化过程中小鼠ESCs抗氧化能力，它有可能通过AR参与子宫内膜容受性的调节，改善子宫内膜容受性。. 本研究提示低浓度DHEA能提高蜕膜化过程中小鼠ESCs抗氧化能力，它有可能通过AR参与子宫内膜容受性的调节，改善子宫内膜容受性。DOR患者妊娠机会低，在没有其他更好的可替代治疗情况下，补充适量DHEA治疗不失为一个选择。然而，DHEA在IVF治疗中的相关作用机制仍有待于进一步研究。