栀子苷拮抗内毒素生物学活性及其分子机制的实验研究

脓毒症的防治是临床亟待解决的难题，从天然药物中筛选并分离提取具有拮抗细菌主要致炎分子的单体化合物是解决这一难题的新策略。本研究拟在成功应用现代生物技术，以LPS为靶点，从中药栀子水提物中定向分离出与LPS具有结合作用的单体化合物（栀子苷）的工作基础上：①检测栀子苷对LPS的中和能力，②在基因、蛋白水平上，检测栀子苷对LPS诱导巨噬细胞活化的影响，③观察栀子苷对脓毒症模型动物的保护作用，藉此明确栀子苷拮抗LPS的体内外生物学活性。在此基础上，采用Real-Time RT-PCR和Western-blot等技术研究栀子苷对LPS诱导巨噬细胞TLR4 mRNA表达、MyD88表达及其下游分子磷酸化、NF-κB活化的影响，以此阐明栀子苷拮抗LPS生物学活性的分子机制。旨在为临床医学亟待解决的脓毒症治疗难题寻找新的药物前体，并为可能的新药目标化合物的设计和深入的构效关系研究奠定基础。

脓毒症的防治是临床亟待解决的难题，从天然药物中筛选并分离提取具有拮抗细菌主要致炎分子的单体化合物是解决这一难题的新策略。本研究在成功应用现代生物技术，以LPS为靶点，从中药栀子水提物中定向分离出与LPS具有结合作用的单体化合物（栀子苷）的基础上，采用ELISA、Real-Time RT-PCR、激光共聚焦和Western-blot等技术在细胞水平及动物整体水平上对栀子苷拮抗LPS生物学活性及其分子机制作进一步研究。研究结果显示：①栀子苷在体内外均可显著拮抗LPS的生物学活性；②栀子苷通过抑制LPS内化、下调巨噬细胞TLR4受体的表达，进而抑制NF-κB和MAPK→AP-1信号通路活化、抑制炎症因子（TNF-α, IL-6）及炎症介质（NO, PGE2）等的转录与表达，从而有效拮抗LPS的生物学活性。研究明确了栀子苷的生物学活性并初步阐明其可能的分子机制，为其作为防治脓毒症药物前体的进一步研究奠定了基础，达到预期效果。