特异性MicroRNA在变应性鼻炎Th1/Th2失调过程中的作用及机制研究

变应性鼻炎发病机制非常复杂，至今仍然没有探讨出理想的治疗方法。辅助性T淋巴细胞（Th）分化异常及相关的细胞因子产物是变应性鼻炎的发生发展的免疫学基础,从源头改变其免疫状态可能是攻克该疾病的希望所在。最近研究发现，miRNAs在机体免疫应答调控方面起着重要作用。理论上分析某些特异miRNAs的异常表达与变应性鼻炎的Th1/Th2失衡有密切关系。本项目拟以变应性鼻炎动物模型为基础，应用microRNA芯片技术初步筛选出变应性鼻炎与正常鼻黏膜组织中表达差异的特异miRNAs，并应用RT-PCR等技术验证这些差异miRNAs。然后探索性地应用特异miRNAs模拟物mimics及阻遏物antagomir于变应性鼻炎动物模型体内，观察microRNAs表达恢复后实验动物Th细胞分化状况及其对变应性炎症的影响，以揭示特异性microRNA在变应性鼻炎发病中的作用，为变应性鼻炎的防治开辟新途径。

变异性鼻炎是耳鼻咽喉头颈外科常见疾病，辅助性T 淋巴细胞（Th）分化异常及相关的细胞因子产物是变应性鼻炎的发生发展的免疫学基础。本项目通过microRNA芯片技术筛选出变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中表达发生显著性改变的microRNA，利用网站对相关microRNA靶点进行预测，结合当前文献研究的进展着眼于在变应性小鼠鼻黏膜中表达下降的mir-135和mir-466a-3p在小鼠变应性鼻炎发病过程中对Th1/Th2细胞失衡的影响。利用双荧光素酶的方法验证网站预测的GATA3为mir-466a-3p和mir-135a的靶基因。通过小鼠脾单个核细胞培养的方法过表达和失表达mir-466a-3p，检测靶基因GATA3表达变化。另外，通过构建mir-135和mir-466a-3p的模拟物治疗变应性鼻炎小鼠，检测小鼠变应性鼻炎相关指标的改变及靶基因GATA3的表达变化。microRNA芯片结果发现，变应性鼻炎小鼠部分microRNAs表达与正常小鼠差异显著。同时，体外实验证实特异性microRNAs的改变可以影响靶基因GATA3的表达，动物实验则发现使特异性microRNAs表达恢复正常也可以使其靶基因GATA3的水平趋于正常从而起到调节Th1/Th2细胞的平衡，达到治疗变应性鼻炎的作用。本研究探究了特异性microRNAs在变应性鼻炎发病中的作用，为其发病机制的研究提供全新的视角，为以特定microRNAs作为分子靶点的变应性鼻炎的治疗奠定理论依据和实验参考，具有重要的理论与实践意义。