肝癌细胞寡核苷酸适配子的筛选及其介导肝癌靶向放疗的实验研究

体液中肿瘤细胞残留与播散是肝癌术后复发的根源。抗体介导肝癌靶向治疗有望解决这一难题，但人源化、小型化抗体存在大量获取技术难度高且批间变异大等缺点，是限制临床应用的瓶颈。寡核苷酸适配子是指用指数富集配体的系统进化(简称SELEX)技术在体外筛选、扩增的具有与靶标高亲和力、高特异性结合的修饰随机寡核苷酸，具有类抗体作用并具有分子量小、无免疫原性、可大量合成和批间变异小等优点。最近的研究表明，活细胞SELEX技术可在靶标未明时产生识别靶细胞的适配子。本课题拟在掌握SELEX核心技术的基础上，利用活细胞SELEX技术，筛选与肝癌细胞特异结合的适配子，采用流式细胞仪和SPECT仪验证其体外、体内结合肝癌细胞的能力，通过培养细胞和荷瘤裸鼠探讨其介导131I靶向杀伤肝癌的效果和机制。本研究将产生肝癌细胞适配子并探讨其介导肝癌靶向放疗的效果和机制，为残留的肿瘤细胞靶向治疗提供新型探针基础。

体液中肿瘤细胞残留与播散是肝癌术后复发的根源。抗体介导肝癌靶向治疗有望解决这一难题，但人源化、小型化抗体存在大量获取技术难度高且批间变异大等缺点，是限制临床应用的瓶颈。寡核苷酸适配子具有类抗体作用并具有分子量小、无免疫原性、可大量合成和批间变异小等优点。本课题利用活细胞SELEX技术，筛选出一组肝癌细胞特异结合的适配子，共7条，命名为：JHIT1、JHIT2、JHIT3、JHIT4、JHIT5、JHIT6、JHIT7；流式细胞仪检测与肝癌细胞的结合解离能力（Kd值）在nM水平，分别如下：JHIT1：207±35；JHIT2：64±11；JHIT3: 272±23；JHIT4：349±70；JHIT5：334±48；JHIT6：249±84；JHIT7：289±56，说明与肝癌细胞结合能力较强，有望成为肝癌治疗的新型探针，为晚期肝癌患者和术后患者体液残留肿瘤细胞靶向治疗提供新型探针基础，有望降低肝癌复发率、改善患者预后，意义重大，是本项目的重要成果。核素I131标记适配子，标记率70%-90.32%；在PBS和生理盐水溶液24小时内基本保持稳定，在血浆里24小时内会降解。 我们利用核素碘131标记两条适配子（JHIT1和JHIT2）,注射入肝癌裸鼠模型，SPECT显像肉眼观察标记适配子在体内浓聚程度不佳，但定量分析可见肿瘤/本底比值最高接近2.6（适配子JHIT2），体内靶向治疗研究有待以后进行。该组适配子结合肝癌细胞表面的蛋白质成分，为将来肝癌细胞肿瘤标记物的研究奠定基础。该组适配子与肺腺癌细胞系（A549）、卵巢癌细胞系（TOV-21G）有明显的结合能力，亦可结合于肺鳞癌细胞系（H226）和胰腺癌细胞系（PL45），可为这四种细胞系的适配子，为该四种细胞系的靶向诊断与治疗奠定新型探针基础，此为本项目的第二个重要成果。诱导干细胞诱导成肝细胞的研究，为将来研究该组适配子是否可以用于干细胞治疗成瘤性的早期监测奠定基础。临床显像研究为将来利用适配子进行靶向显像奠定技术基础。