MicroRNA对羧基还原酶1转录后调控及3'-非翻译区基因多态性对调控的影响

羧基还原酶1（CBR1）在蒽环类抗癌药物的代谢过程中起重要作用，阐明CBR1的调控机理不仅有极高的学术价值，而且对提高药效、降低毒副作用，指导个体化用药等方面有显著的社会经济效益。CBR1的个体差异和该基因3'UTR的单核苷酸多态性（SNP）1096G>A突变有关。前期工作显示miR-656和miR-574可能参与CBR1转录后调控，并受3'UTR SNP的影响。在调查中国汉族人CBR1 3'UTR SNP的基础上，构建稳定表达CBR1 的野生型和突变型细胞株，建立miRNA过表达和抑制的体外模型，研究它们在CBR1调控中的作用；通过比较野生型和突变型细胞株中CBR1 mRNA的半衰期，对调控机理进行初步研究；在此基础上对两种miRNA是否存在协同或者拮抗效应进行探讨；并对乳腺癌中CBR1表达和活性与上述两种miRNA表达的关系进行临床分析，探讨其作为个体化应用蒽环类药物生物标记的可能。

羰基还原酶1（CBR1）在蒽环类抗癌药物的代谢过程中起重要作用，阐明CBR1的调控机理对提高药效、降低毒副作用，指导蒽环类抗癌药物个体化用药等方面有着重要的意义。本研究首先对中国汉族人CBR1’-UTR个体差异单核苷酸多态性（SNP）1096G>A突变和表型的相关性进行了研究，然后对可能参与转录后调控CBR1的microRNA进行了筛选和验证，最后对舌癌组织CBR1的表达进行了研究。. 对中国健康汉族人CBR1 表型和3’-UTR 基因型相关性进行研究，结果发现：单核苷酸多态性rs9024G>A的等位基因频率为18.5%，同时发现rs9024G>A与rs20572C>T存在连锁不平衡现象（Linkage disequilibrium），没有发现新的基因突变。CBR1蛋白的表达量存在明显的个体差异，CBR1蛋白的表达量和rs9024G>A的基因型存在相关性。. 采用生物信息学方法筛选出候选miRNA ：miR-656，miR-574和miR-921。采用报告基因荧光素酶法初步验证候选miRNA与CBR1 3’UTR的相互作用，结果表明miR-656不影响荧光报告酶的活性，miR-574和miR921能够降低荧光报告酶的活性。miR-574和miR-921对嵌合了野生型CBR1 3’-UTR（rs9024G）和突变型CBR1 3’-UTR（rs9024A）的报告基因的表达存在不同的影响。miR-574对野生型和突变型CBR1都能调控，miR-921仅能调控野生型CBR1。. 已构建完成CBR1的表达质粒，稳定表达CBR1的细胞模型还在筛选，该模型将用于进一步筛选新的候选microRNA。. 已经对UM1、HepG-2、MCF-7、Hela、K562、SCC15、A549、DU145、K562等肿瘤细胞进行CBR1的表型和基因型研究。结果表明上述几种肿瘤细胞CBR1rs9024G>A的基因型都为野生型，CBR1mRNA 和CBR1蛋白在不同肿瘤细胞中的表达量存在差异。 . 对20例舌癌组织进行的研究发现，舌癌组织rs9024G>A突变的发生率为25.0%，舌癌组织均表达CBR1，不同个体CBR1的表达存在个体差异。. 长链非编码RNA在唾液、舌癌组织均有表达，可用于舌癌诊断。. 本研究已发表论文一篇，培养研究生一名。