新一代全体外共价展示分子文库的构想与实践

噬菌体P2的A蛋白（P2 A蛋白）是一种复制过程中的启动蛋白，P2 A蛋白可以使其编码DNA某单链断列并共价结合在这段序列上，即形成编码P2 A蛋白的P2 A基因与其基因表达产物P2 A蛋白的共价结合物。本研究利用P2噬菌体A蛋白的这种顺式结合功能设计开发新一代全体外共价展示分子文库。通过PCR等体外操作将随机序列插入到P2 A基因的上游或下游, 构建一种高库容的DNA分子库。然后经过无细胞的体外表达系统进行高效转录和翻译，使随机肽以融合肽形式表达在P2 A蛋白的N端或C端并形成DNA与蛋白质共价结合复合物的分子文库。这种分子文库完全避免了DNA转入细胞等体内步骤，是全体外操作技术。不仅库容远远高于噬菌体展示肽库等现有分子文库，而且具有稳定、操作简单、可控性强、可在较短时间内完成多轮次筛选等特点，是一项很有开发前景的研究蛋白质多肽间相互作用的新方法、新技术。