长型五聚素3在年龄相关性黄斑变性中作用及调控的研究

长型五聚素3（PTX3）是心血管系统炎症的重要调控因子，能抑制新生血管形成，其与补体因子H（CFH）的结合，可能是年龄相关性黄斑退化（AMD）发病机制中重要的过程。但目前PTX3在AMD中的作用尚未明确。因此我们提出假说，PTX3参与AMD发病，其机制可能通过与CFH的结合，影响CFH的定位及对替代通路的控制，以及调节膜络膜新生血管形成。为验证假说，本项目拟检验PTX3的血浆水平及多态性与AMD的相关性，并测定PTX3基因中CpG岛的甲基化程度，研究其表观遗传学改变。在体外成纤维细胞系中表达PTX3变异体的荧光素酶报告基因和迷你基因，分析启动子区及基因内的多态性对基因表达的影响。检查PTX3 knockdown的小鼠体内脉络膜新生血管中PTX3的表达及细胞组织形态上的改变。通过本项目的研究，希望可以明确PTX3在AMD的作用及其调控机制，并为以后临床治疗提供新的途径和靶点。

长型五聚素3（PTX3）是心血管系统炎症的重要调控因子，能抑制新生血管形成，其与补体因子H（CFH）的结合，可能是年龄相关性黄斑变性（AMD）发病机制中重要的过程。但目前PTX3在AMD中的作用尚未明确。我们在本项目中对PTX3在AMD中的作用及其机制进行了深入的探讨和研究，主要分析了PTX3和其同源物C-反应蛋白(CRP)的单核苷酸多态性和单倍型在AMD及其不同亚型病人中的遗传关联；研究了早期年龄相关性黄斑病变（ARM）的遗传关联；检验PTX3的同源物CRP血浆水平与基因多态性的相关性；并以激光诱导脉络膜新生血管（CNV）小鼠作为动物模型，利用实时定量PCR(qPCR)和转录组测序(RNA-seq)进行了Ptx3表达及表观遗传调控的体内(in vivo)研究。我们建立了粤东地区AMD、早期ARM病人和对照较为完善的样本库；我们的研究结果首次证明，PTX3是一个新的AMD易感基因，特别是其遗传多态性可能与AMD的亚型息肉样脉络膜血管病变有更加密切的关联；发现已知的主要AMD相关基因在早期ARM中无显著关联；对血浆蛋白水平的研究证明，CRP的表达受明确的遗传调控，其启动子区的多态性影响蛋白的表达水平；获得了激光诱导CNV小鼠脉络膜中Ptx3表达的动态数据，证明其参与了CNV的发生过程；取得激光诱导CNV小鼠视网膜的RNA-seq数据和表达谱，发现了体内条件下Ptx3可能受微小RNA (microRNA) miR29b-2表观遗传调控的重要证据，以及同一组织中Ptx3与Vegf、Htra1和Cfh等AMD重要通路的关系。根据项目的部分数据，已经撰写了10篇以上论文，已发表的有6篇SCI期刊和2篇国内期刊论文，累计影响因子超过10，在6次以上国内外学术会议进行过报告并获得4次奖励，培养研究生2名，课题组人员晋升高级职称3人。通过本项目的研究，为理解PTX3在CNV的发生和AMD的发病过程中可能起的重要作用提供了有用的数据，也为进一步开发PTX3作为为临床治疗提供新的途径和靶点提供了重要的参考。