CXCL13/CXCR5轴对B细胞中枢趋化和浸润的影响及其在神经梅毒发生发展中的作用机制研究

Symptomatic neurosyphilis may have brain parenchymal degeneration, resulting in paralytic dementia ,gumma and other serious adverse outcomes, while nonsymptomatic neurosyphilis has no tissue damage, whose mechanism remains unknown. Our previous clinical study showed that the higher levels of CXCL13 were found in the cerebrospinal fluid (CSF) of neurosyphilis, accompanying with higher B-cell/plasma infiltration,increased neuron injury-associated Tau protein and the severe CNS lesions in brain tissues.We thus hypothesized that CXCL13 in CSF might highly correlate with B-cell accumulation and brain degeneration in neurosyphilis. We then explore: 1) the relationship between the CXCL13 levels and the disease processes; 2) The molecular mechanism of CXCL13 levels, B-cell infiltration and the brain tissue inflammation injury; 3) The mechanism of CXCL13 in the damage of neurons and brain tissues. Insights into the pathogenesis of neurosyphilis will provide new targets and therapeutic strategy for neurosyphilis in clinical practice.

神经梅毒危害极大，有症状神经梅毒有脑部病变，造成麻痹性痴呆、颅内占位等严重不良后果，而无症状神经梅毒却无组织损伤，其机理迄今不明。我们前期研究发现：神经梅毒脑脊液中趋化因子CXLC13越高神经系统病变越重，近期研究显示：神经梅毒脑组织中有大量淋巴细胞及浆细胞浸润；脑脊液中B细胞数目显著增高，且其数量增高与CXCL13呈正相关，也与神经元损伤因子Tau蛋白增高呈正相关。据此我们提出：“CXCL13可能通过介导B淋巴细胞向中枢趋化并浸润从而引起神经梅毒的神经元损伤”的科学假设。为验证这一假设，我们拟深入研究：1）神经梅毒脑脊液中CXCL13水平与神经梅毒发生及疾病进程的相关性；2）脑脊液内CXCL13对B细胞中枢系统的特异趋化的分子机制；3）CXCL13调控的B细胞中枢浸润损伤神经元细胞的作用机制。项目的完成将为理解神经梅毒中枢损伤分子机制提供创新性思路，为临床有效治疗神经梅毒提供新型靶点。

目前，神经梅毒的诊断仍是一个主要的临床挑战。脑脊液（CSF）性病研究实验室（VDRL）滴度对神经梅毒的诊断不够敏感，神经梅毒患者尤其是无症状神经梅毒患者可呈阴性。为了寻找神经梅毒的生物标志物，我们研究了神经梅毒患者脑脊液中的趋化因子谱，发现神经梅毒患者脑脊液中CXCL13、CXCL10和CXCL8的浓度有选择性地升高，并与脑脊液蛋白浓度和CSF-VDRL滴度相关。抗生素治疗后，这些趋化因子的浓度显著降低。CSF-CXCL13、CXCL8、CXCL10的ROC曲线下面积（AUC）和CXCL13、CXCL8、CXCL10的CSF/血清比值在神经梅毒诊断中的意义分别为0.940、0.899、0.915、0.963、0.846和0.926。CSF-CXCL13、CXCL8、CXCL10对神经梅毒的敏感性/特异性分别为85.4%/89.1%、79%/90.1%和79.6%/91.1%、86.6%/99%、79%/73.3%和86%/92.1%。我们的结果表明，CXCL13、CXCL8和CXCL10的浓度升高或它们的CSF/血清比值升高可能是神经梅毒的潜在生物标记物，尤其是对无症状神经梅毒。这些趋化因子浓度的降低可能预示着抗生素治疗的预后。. 此外，神经梅毒患者的神经系统损害与体液免疫反应有关。然而神经梅毒引起和维持体液免疫的机制尚不清楚。我们采用流式细胞术检测神经梅毒和非神经梅毒患者B细胞的表型。酶联免疫吸附法检测免疫球蛋白指数和趋化因子配体CXCL13的表达。移行和抑制试验用改良的小室试验进行评价。采用免疫组化方法研究CXCL13+细胞、CD 20+B细胞、CD3+T细胞、CD138+浆细胞和CD35+滤泡树突状细胞的存在。结果发现：在神经梅毒患者脑脊液（CSF）中观察到B细胞的富集和活化。免疫球蛋白指数升高，并与神经梅毒的进展有关。CSF-CXCL13在体内外高表达介导B细胞迁移。CSF-B细胞、免疫球蛋白指数和CSF-CXCL13水平呈正相关。异位生发中（EGCs）是颅内梅毒性胶质瘤体液免疫的重要结构。我们的结果提示：CXCL13/CXCR5介导B细胞的聚集，通过EGCs的形成引导异常体液免疫反应，提示神经梅毒神经损伤的分子机制。