制巴戟炮制前后功效变化的物质基础研究

本课题采用中药化学、中药分析以及中药药理的方法，对巴戟天的祛风湿、壮肾阳以及抗抑郁的药效物质基础进行筛选、分离，结合制巴戟临床适应症的变化，考察巴戟天是否存在燥性或是毒性，甘草水制后是否能缓和其燥性或是起到减毒增效的作用。采用TLC、HPLC指纹图谱法比较分析巴戟天和制巴戟化学成分差异；运用色谱法分离纯化炮制后产生的新成分和增量成分，结合光谱数据鉴定其结构。通过对新成分和增量成分的定性、定量分析揭示制巴戟炮制前后化学成分的变化过程和变化机理;依据制巴戟临床功效的变化，开展新成分或增量成分的缓和燥性、补肾阳、祛风湿及抗抑郁等药理学研究。以此综合解析制巴戟天炮制原理；根据炮制原理，建立规范的适合产业化生产的炮制规范，建立科学合理的制巴戟炮制品的质量标准。

采用硅胶柱层析等手段对巴戟天化学成分进行系统分离，并采用光谱手段鉴定了其中的16个化合物结构，分别为1-甲基蒽醌，1,8-二羟基-3-甲基-5-羟甲基蒽醌，1,8-二羟基-3-羟甲基蒽醌，b-谷甾醇, 2-羟基-1-甲氧基蒽醌, 柚木醌, 甲基异茜草素, 甲基异茜草素-1-甲醚, 1,2-二甲氧基-3-羟基蒽醌, 2-羟基-3-甲基蒽醌, 1,3-二羟基-2-甲氧基蒽醌, 1-羟基-2-甲氧基-3-甲基蒽醌, 1-羟基蒽醌, α-D-葡萄糖, 5-羟甲基糠醛, 水晶兰苷。对巴戟天炮制前后化学成分变化规律进行了研究，选择1,2-二甲氧基-3-羟基蒽醌等5种茜草素蒽醌为指标，采用HPLC方法对巴戟天及其不同炮制品种进行测定，结果显示制巴戟的5种蒽醌总量最高，其次是盐蒸巴戟；这一结果与紫外法测定炮制前后总蒽醌结果相一致。采用HPLC对巴戟天炮制前后的寡糖和水晶兰苷的含量进行了测定，盐巴戟的含量均是最高的；采用硫酸比色法对巴戟天炮制前后的多糖含量进行了测定，制巴戟的总多糖含量最高。对巴戟天的木心和肉中的化学成分进行了比较，结果巴戟天木心中有效成分的含量均明显低于巴戟肉，而手扒去心方法优于蒸法去心。建立了不同产地巴戟天、不同炮制品的特征图谱，形成了巴戟天小极性（主要为蒽醌类）和大极性（主要为寡糖）部分的共有模式，并指认了其中的部分峰。以耐斯糖、总多糖、甘草酸、甘草苷为指标，采用正交设计的方法，优选盐巴戟和制巴戟的最佳炮制工艺。对巴戟天不同提取部位，不同炮制品的抗风湿和补肾壮阳的作用进行了药效学研究，结果表明乙酸乙酯萃取部位和剩余水部分的补肾壮阳作用明显；正丁醇萃取部位的抗风湿作用明显；盐巴戟的抗风湿和补肾壮阳的作用均是最好的，其次是制巴戟。对巴戟天不同炮制品的脾肾双补作用进行了药效学研究，结果表明制巴戟对脾肾双虚大鼠的作用最明显；对巴戟天及其不同炮制品的急性毒性进行了研究，从病理切片结果来看，生巴戟、巴戟肉、盐巴戟对肝脏和肾脏具有一定的毒性，而制巴戟毒性却明显降低。对巴戟天、盐巴戟及制巴戟中水晶兰苷的药代动力学进行了研究，结果巴戟天炮制后能提高水晶兰苷在大鼠体内生物利用度。考察了炮制（去心、盐蒸、甘草水煮、酒蒸）对巴戟天中的甲基异茜草素-1-甲醚、耐斯糖、水晶兰苷在水煎液中的溶出影响，结果表明炮制能促进这三种成分的溶出。制巴戟炮制机理可概括为“增醌，增糖，减毒，增强脾肾双补”