约氏疟原虫红外期免疫相关蛋白的富集、筛选及功能研究

疟原虫红外期相关蛋白种类及免疫反应特性是研制有效红外期疫苗、寻找药物靶标的基础。本项目以约氏疟原虫－斯氏按蚊模型，采用二维差异凝胶电泳(2-D DIGE)技术分离疟原虫感染肝脏蛋白，差减正常肝脏蛋白，检获疟原虫红外期相关蛋白组分；再经放射减毒子孢子感染小鼠血清免疫识别，筛选、鉴定出红外期疟原虫高表达蛋白；经MS、MS/MS获得相关蛋白的肽质量指纹图谱(PMF)和氨基酸测序结果，Mascot系统解析PMF信息和揭示疟原虫外期蛋白的编码氨基酸、基因序列；以Primer5.0分析、设计引物，RT-PCR扩增基因片段，通过蛋白真核表达、纯化分离获得红外期特异蛋白。将红外期疟原虫重组蛋白免疫小鼠，与放射减毒子孢子作比较，检测细胞免疫反应和对子孢子攻击感染的阻断作用。探讨疟原虫红外期免疫保护相关分子及介导消除性免疫机制，为研制有效的疟原虫红外期肽疫苗提供理论依据。