CD40联合IFN-a和IL-7诱导新型过继免疫治疗细胞的实验研究

Adoptive immunotherapy is a conventional method in cancer treatment after radiotherapy and chemotherapy. Cytokine induced killers cells(CIK cells) represent one of the promising adoptive cellular immunotherapy. But there are some limitations and shortcomings in traditional CIK because of a number of IL-2 were be used. We plan to evaluate a new method of adoptive immunotherapy – using antibody CD40(5C11) which prepared by our institute combined with IFN-α and IL-7 induce cells to attack tumors. Compared with the traditional CIK group, our preliminary studies suggest that the ratio of NK-T cells expressed CD3+CD56+ and the central memory T cells (TCM) were risen dramatically in our experimental group. While the ratio of negative co-stimulation molecules PD-1, induce regulatory t cells and ICOS+Treg were significantly reduce. The mechanism will be discussed in further reseach. This study will provide a new treatment for cancer adoptive immunotherapy.

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)过继免疫治疗是肿瘤免疫治疗的一种方法，但由于常规CIK培养使用大剂量白细胞介素2(IL-2)，往往可以介导负性分子（PD-1/PD-L1）表达和抑制性Treg扩增，这可能是影响其疗效的主要原因。我们前期研究还发现常规CIK扩增还可诱导被认为与肿瘤免疫逃逸相关的ICOS+Treg。而运用本单位研制的CD40激发性抗体联合细胞因子IFN-α和IL-7体外诱导的过继免疫细胞，其CD3+CD56+NK-T细胞，中枢记忆性T细胞比例明显增加；负性共刺激分子PD-1及Treg比例下调，并且出现一群Mo-NK-DC样细胞。本研究以此为切入点，运用CD40抗体联合细胞因子IFN-α和IL-7体外制备一种新型过继免疫细胞，从细胞增殖、细胞生物学特性、细胞在体内迁移分布和细胞的体内外杀伤效应等方面探讨其与过继免疫治疗的作用及可能机制，以期为肿瘤过继免疫治疗开辟一个新的治疗方案。

结直肠癌（CRC）是当今常见的恶性消化道肿瘤之一，目前临床上对CRC的治疗方式包括手术治疗、化疗和放疗等，但是多数CRC患者确诊时已发生转移，或再次复发，无法再进行手术或其他治疗。过继免疫细胞治疗作为辅助放疗和化疗是当今肿瘤治疗的一种常规方法，但由于经典CIK用长期用IL-2，导致负性共刺激分子PD-1、Tim-3，负性调节性细胞T细胞（Treg）上调。而实验数据显示，CRC患者本身体内的负性共刺激分子PD-1、Tim-3表达较正常人高。因此我们提出一种新的过继免疫治疗方法——运用抗体CD40(5C11)联合PD-L1、IL-7和IL-15诱导细胞杀伤肿瘤。数据显示，CD40联合PD-L1和IL-7和IL-15组中CD3+CD56+具有抗肿瘤能力NK-T细胞和中枢记忆性T细胞比例明显增加；抑制了负性共刺激分子PD-1、PD-L1、Tim-3和Treg比例，体外杀伤实验现在CD40激发组对肿瘤的杀伤能力更强。同时，Rag2 -/-γc-/-NSG人源化荷瘤小鼠的成功建立，体内实验数据显示，较传统CD3激发组，CD40激发治疗组生存期较长，肿瘤体积最小，且白细胞最接近正常数值。本研究为肿瘤过继免疫治疗开辟一个新的治疗方案。