AnnexinⅤ在大肠癌中高表达的意义及其与PKC通路的关系

膜联蛋白A5（AnnexinⅤ）是同PKC（蛋白激酶C）通路密切相关的重要分子。但多年的研究多用于凋亡检测和诊断，并未阐明其在大肠癌中的病理生理意义和机制。我们前期研究表明：结直肠癌中AnnexinⅤ的mRNA和蛋白水平都显著升高，其可能通过与δPKC直接结合来激活PKC活性从而影响下游信号传导，促进肿瘤增殖、抑制调亡。本课题拟多样本检测及随访明确Annexin Ⅴ与大肠癌的分期和预后的关系；通过改变其表达水平研究对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响；并验证在肠癌中AnnexinⅤ与δPKC的结合和作用；通过改变AnnexinV表达水平影响PKC活性变化；通过动物试验体内验证AnnexinⅤ的改变影响肿瘤的增殖和调亡。最终验证Annexin Ⅴ参与大肠癌细胞中PKC活性的激活而影响了大肠癌细胞的增殖和凋亡，为大肠癌的发生、发展机制以及诊断、治疗提供了一个重要的靶点和思路。

结直肠癌在世界范围内居恶性肿瘤第三位，其发病率和死亡率逐年上升，是临床和公共卫生领域面临的重大挑战之一。膜联蛋白A5（ANXA5）参与包括结直肠癌在内的多种肿瘤的发生和发展，但具体的分子机制目前仍然不清。研究显示，ANXA5能与蛋白激酶C（PKC）相互作用，该作用对于PKC的定位和激活至关重要，并可能参与多种肿瘤的发生。但是ANXA5与PKC的相互作用尚需确证，其在病理意义也有待揭示。为了明确ANXA5与结直肠癌的相关性，探索其参与肿瘤发生的机制，我们证实ANXA5在患者肿瘤组织中上调，较高的ANXA5水平与临床病理特征密切相关。进一步研究证实，肿瘤组织中ANXA5的表达与PKC的水平成正相关。通过激光共聚焦显微镜，我们明确PKC的激活导致ANXA5重定位，提示二者共同参与了转录过程。在此基础之上，我们构建稳定高、低表达ANXA5的稳转细胞系，并进而在细胞水平检测ANXA5与细胞生理特征间的相关性。结果显示，上调ANXA5促进肿瘤细胞增殖、抑制细胞凋亡，但是不影响细胞迁移和侵袭。与此同时，免疫共沉淀研究为ANXA5与PKC的相互作用提供了直接证据。我们还构建结直肠癌原位移植动物模型并分析调控ANXA5对于肿瘤生长的影响。我们发现，上调ANXA5能够显著促进体内肿瘤的生长。由于PKC能够通过p38途径调控细胞的生长和凋亡，我们进一步检测并证实，无论体内还是体外，上调ANXA5都促进p38的磷酸化。我们还在患者组织样本中检测和分析PKC底物——膜联蛋白A2（ANXA2）的磷酸化水平，证实肿瘤组织中磷酸化ANXA2水平高于对照，且磷酸化ANXA2水平较高的患者，其预后较差。综上所述，我们的研究揭示ANXA5与PKC相互作用并进而通过p38信号通路促进结直肠癌的发生。研究成果将更好的理解ANXA5与PKC相互作用参与肿瘤发生的机制，并将有助于开发更加有效地诊断标志物和治疗靶点。结果已总结成三篇论文，一篇已发表在《Journal of Clinical Gastroenterology》上，另外两篇分别投稿至《Journal of Clinical Gastroenterology》和《中华胃肠外科杂志》，目前均在修回。此外，本课题开展过程中培养研究生1名。