红萸饮干预IL6/STAT3信号通路及其相关调控基因及其在炎症性肠病中的机制研究

Inflammatory bowel disease is a group of unknown cause chronic inflammatory bowel disease, its exact etiology and pathogenesis has not yet fully understood, and it is difficulty to cure. In the course of the nearly 10 years of clinical experience, we created Chinese decoction Hongyuyin under the theory of chinese traditional medicine to heat-clearing and detoxifying, cool blood ,promoting blood circulation, together with warm reinforcing spleen and kidney,and have good affect in clinical. This study based on the previous studies, from three aspects to study the relationship between IL-6 / STAT3 signal pathway and IBD. We plan to research Hongyuyin recipe and its disassembled prescriptions and its function in IL-6 / STAT3 signaling pathways with cell culture.We observe the colonic mucosa injury in mice and IBD patients with the histopathological technology and method.Using molecular biology, immunohistochemical techniques and methods, we study the amout of IL-6 and STAT3, pSTAT3 and downstream gene protein c-myc, surviv and expression. We want to prove the ralationship between IL-6 / STAT3 signaling pathways and IBD, and Hongyuyin can inhibiting this signaling pathways and have therapeutic effect.

炎症性肠病是一组原因不明的慢性肠道炎症性疾病，其确切病因及病机尚未完全明确，为临床有效治疗带来一定困难。本课题组经近十年的临床经验总结，结合炎症性肠病的湿毒内蕴、气血壅滞、脾肾亏虚病机，创立红萸饮，以清热解毒、凉血活血，兼之温补脾肾，在临床上取得良好疗效。本研究在前期研究基础上，拟从三方面证实IL-6/STAT3信号通路与IBD发病的关系。采用体外细胞培养技术，研究红萸饮拆方对JAK2/STAT3信号通路的影响作用；采用组织病理学技术与方法，研究炎症性肠病（IBD）造模小鼠及IBD患者结肠黏膜观察肠黏膜损伤情况；采用分子生物学、免疫组化等技术与方法，检测血清及肠粘膜IL-6和STAT3、磷酸化STAT3蛋白及其下游基因c-myc、surviv等的表达。证明IL-6/STAT3信号通路与IBD的关系，并且中药红萸饮通过抑制该信号通路而起到治疗作用。

溃疡性结肠炎（UC）是一种病因尚不明确的慢性非特异性结肠炎症，中医药在治疗溃疡性结肠炎方面有很大的优势。其辨证施治、补虚泻实、调整阴阳的思维方式与现代免疫学不谋而合。本研究通过中药红萸饮治疗溃疡性结肠炎的临床和实验研究，证实了红萸饮治疗溃疡性结肠炎的疗效，更从各个方面探索溃疡性结肠炎的发病机制及中药红萸饮的作用靶点。.在体外实验中，建立了pGL4-STAT3-Luc 报告基因稳转细胞系与 Luciferase 报告基因检测方法，发现100ug/ml的大血藤水提液对STAT3有抑制作用，对经IL-6刺激的STAT3有进一步的抑制。.在动物实验中，建立了DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠模型。中药红萸饮对模型组小鼠体重、结肠长度及病理学评分均有改善作用，有统计学差异（p<0.01）。通过ELISA、Western Blotting、qPCR等实验技术的检测，中药红萸饮治疗后，与空白对照组相比，血清IL-6、结肠组织STAT3、p-STAT3蛋白及自噬相关蛋白LC3A/B、Beclin1表达均明显下降（p<0.05）,直肠组织VEGF、survivin mRNA表达下调（p<0.05），p53表达升高（p<0.05）。并且拓展建立了STAT3、p-STAT3与Beclin1等自噬相关蛋白的Western Blotting检测体系并进行相关检测。实验表明：中药红萸饮能够降低DSS诱导的UC小鼠的结肠组织p-STAT3、STAT3蛋白的表达,抑制VEGF、survivin mRNA的表达，增加p53 mRNA的表达，同时降低自噬相关蛋白LC3A/B、Beclin1的表达。.在临床研究中发现，溃疡性结肠炎患者血清IL-6值有不同程度的升高，发现IL-6值与MAYO值得pearson相关系数为0.294，呈弱相关。经中药红萸饮治疗后患者血清IL-6高者明显下降，但由于例数较少，与治疗前比较无统计学差异。.通过本研究，我们认为红萸饮可以抑制IL-6/STAT3信号通路，其组方中的君药大血藤可能是主要抑制成分。其作用机制可能通过直接抑制IL-6/STAT3信号通路,抑制STAT3的表达水平与转录活性，从而降低p-STAT3的水平。也可能通过抑制自噬活性，抑制了IL-6的表达，进而影响STAT3的活性。IL-6/STAT3信号通路与自噬的相互调控非常复杂，具体机制还有待进一步研究。