CD200R对肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其在流感病毒感染早期的作用研究

流感病毒是严重危害人类健康的一类病原体。肺泡巨噬细胞（Alveolar macrophage, AM）作为机体对呼吸道病原体感染的第一道防线，在抗流感病毒感染过程中起着非常重要的作用。我们在前期实验中发现，感染早期（感染后1-2天）的AM可保护GM-CSF转基因（SPC-GM）小鼠100%抗高剂量流感病毒感染，SPC-GM小鼠的AM表面 CD200R表达水平显著低于WT小鼠，同时细胞凋亡比例和Fas表达水平也较低。CD200-CD200R相互作用可抑制巨噬细胞的功能和活化，减轻流感病毒感染后期的炎性损伤，同时在感染早期CD200-/-小鼠清除病毒能力较强。本课题拟采用小鼠疾病模型，阐明流感病毒感染早期AM的动态变化，探讨CD200-CD200R相互作用对AM凋亡的影响及其机制，同时，应用CD200R阻断剂探索其在流感病毒感染早期对小鼠的保护作用，为早期防治高剂量流感病毒感染提供新的手段。

本项目完成了项目设计中的各项研究计划，基本达到了预期研究目标。首先，采用了CD45.1-CD45.2骨髓移植小鼠，证实流感病毒感染后外周单核细胞向肺内迁移，在感染后第二天即成为肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage, AM）的主要组成（即浸润型AM），与其相比，肺内驻留型AM凋亡细胞比例增加，细胞数量显著减少，同时细胞表面CD200R表达明显降低。其次，对CD200-CD200R 调节AM凋亡及其通路进行了研究。应用分离纯化的小鼠AM或细胞株MH-S进行体外实验，发现采用anti-CD200R1阻断CD200-CD200R通路可增高感染引起的TNF-α和IL-6分泌，细胞表面Fas表达增强，进而引起细胞凋亡比例增加。采用CD200 Fc刺激CD200-CD200R通路未发现相关的显著变化。Western blot检测结果显示干预肺泡巨噬细胞CD200-CD200R信号通路可调节凋亡相关蛋白BCL-xL、Bad和Bid的表达，进而影响细胞的凋亡。.根据以上研究结果，我们认为在流感病毒感染早期，阻断CD200-CD200R通路可增强AM的活化及清除病毒的能力，与此同时促进驻留型AM的凋亡，使得肺内以CD200R高表达的外周浸润性AM为主，避免AM的持续活化引起肺组织损伤。实验结果表明，流感病毒感染小鼠一天后，支气管给入CD200 Fc刺激CD200-CD200R信号，可加重病情，并延缓小鼠的恢复；给入anti-CD200R1以阻断此通路，结果未发现具有本研究预期的保护作用。我们推测原因可能是给入的anti-CD200R1抗体未能有效地阻断肺内CD200-CD200R通路。研究表明，CD200R家族有数个异构体，除已证实CD200R1可与CD200结合影响单核/巨噬细胞功能，其它异构体的功能尚未十分明确，有可能也参与了CD200-CD200R通路对AM的调节。此外，我们在持久性有机污染物十溴联苯醚（BDE-209）暴露动物实验中发现，高剂量BDE-209暴露三个月后，小鼠外周血及脾脏中的单核细胞均显著减少，进一步研究发现脾脏中单核细胞表面CD200R表达显著增强，凋亡细胞比例也明显增加。此项发现也进一步说明CD200-CD200R通路有可能参与了单核/巨噬细胞的凋亡过程。