HMGB1翻译后修饰相关核移位及其在恶性黑素瘤发病机制中的作用研究

HMGB1是一种非组蛋白核蛋白，广泛存在于真核细胞且在多种恶性肿瘤组织中呈高表达。它在胞核/浆之间的移位由乙酰化或磷酸化修饰机制调控。HMGB1在细胞内的定位决定了其功能：在核内通过基因调控维持正常生理功能或影响肿瘤细胞的生物学行为；在胞外则具有致炎因子效应并能促进肿瘤的生长和浸润。本项目组初步研究发现恶性黑素瘤中HMGB1存在高水平的核移位现象，且该现象相对于其他皮肤肿瘤而言具有一定的特异性。为揭示这一现象的可能机制及功能意义，本项目组拟通过基于PCR的体外定点诱变、双向凝胶电泳技术等多种手段研究恶性黑素瘤中导致HMGB1定位改变的翻译后修饰机制，并在上述基础上进一步运用RNA干扰、荧光共定位、免疫共沉淀、荧光素酶报告基因分析等多项技术全面观察，并多向了解HMGB1不同亚细胞定位及抑制其表达水平对肿瘤细胞后续生物学行为效应的影响及作用途径，为寻求恶性黑素瘤新的发病机制乃至治疗提供新思路。

现有的研究提示HMGB1（high mobility group box 1）可能参与肿瘤的发生、发展等诸多生物学过程，但其在恶性黑色素瘤中的临床意义以及对恶性黑色素瘤生物学行为的具体作用机制尚不明确。依照研究计划，我们发现了恶性黑素瘤组织中HMGB1高表达水平与胞浆定位分别与肿瘤的厚度、分期、有丝分裂指数及转移等呈正相关，并且HMGB1表达水平可作为判断恶性黑素瘤预后的一个独立因素。运用RNA干扰、荧光素酶报告基因等分子生物学技术和动物模型，我们还深入发现：抑制恶性黑素瘤细胞HMGB1的表达水平可通过非p53依赖的途径诱导p21的表达水平增高，继而导致细胞周期G1/S停滞及细胞衰老。通过基于PCR的体外定点诱变技术和荧光共定位等技术，我们成功构建了各型HMGB1亚细胞定位的慢病毒质粒并高效率转染了A375细胞株。本项目还发现了HMGB1对恶性黑素瘤细胞侵袭、转移等后续生物学效应的影响。上述结果提示了HMGB1可能作为一种癌基因通过改变蛋白的表达水平或定位进而影响了恶性黑素瘤的生物学效应，为恶性黑素瘤提供了新的治疗靶点。通过以上研究，我们培养了博士研究生1名、硕士研究生2名；发表SCI论文2篇，总影响因子为8.54，发表会议论文2篇并受邀做口头发言；另有2篇SCI论文已总结成文并投稿。