血清-巨噬细胞间胆固醇流动与动脉粥样硬化关系研究

越来越多的证据表明, 高密度脂蛋白(HDL)胆固醇(HDL-C)水平不能反映HDL异质性以及HDL相关的动脉粥样硬化危险，测定HDL介导的巨噬细胞胆固醇逆向转运或其主要组成成分, 如胆固醇从巨噬细胞的净流出, 可能是评价HDL功能的重要手段。然而，目前普遍采用的细胞胆固醇流出实验不能测定胆固醇在血清和细胞之间的双向流动；采用放射性同位素, 安全性差；结果受多种因素影响；且胆固醇流出与HDL亚类的关系与流行病学研究结果相矛盾。本项目拟在胆固醇和脂蛋白胆固醇准确测定及动脉粥样硬化危险因素研究基础上，研究并建立安全、可靠的血清-巨噬细胞间胆固醇流动的细胞分析体系和准确测定方法，研究胆固醇净流动与胆固醇流出的关系，以及与脂蛋白谱和动脉粥样硬化的关系。此方法的建立，将为HDL功能评价及心血管病危险分析提供有应用价值的危险预示和干预评价指标。

越来越多的研究表明, 高密度脂蛋白(HDL)胆固醇(HDL-C)水平不能反映HDL异质性以及HDL相关的动脉粥样硬化危险。研究HDL代谢和功能，以寻找新的HDL功能和心血管病（CVD）危险预示指标，是CVD防治研究的重要问题。HDL最重要的功能是促进胆固醇逆向转运(RCT)。通过RCT，外周组织和巨噬细胞胆固醇流出、酯化、最终被转移到肝脏进行代谢。巨噬细胞胆固醇流出是RCT的初始步骤，也是防止细胞胆固醇堆积最直接的一步，所以测定RCT的主要组成部分, 如胆固醇从巨噬细胞的净流出,是评价HDL功能的重要手段。然而，目前普遍采用的细胞胆固醇流出实验不能测定胆固醇在血清和细胞之间的双向流动；采用放射性同位素, 安全性差；结果受多种因素影响；且胆固醇流出与HDL亚类的关系与流行病学研究结果相矛盾。.本项目研究了巨噬细胞培养条件，筛选了作为示踪剂的胆固醇类似物，研究了血清和不同脂蛋白孵育细胞时细胞胆固醇内外流动，细胞内胆固醇酯化，细胞裂解和脂质抽提等，优化了细胞胆固醇测定方法。在此基础上，建立了HPLC测定细胞胆固醇净流动的方法，方法平均批内变异和总变异分别为0.81%~4.03%和4.25%~6.58%。75例健康志愿者研究发现胆固醇净流动与血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、hsCRP，载脂蛋白（apo）CII、apoCIII、小而密低密度脂蛋白胆固醇（LDLbC）、HDL胆固醇酯化速率（FERHDL）（P<0.001），Preβ-HDL（P <0.01）等呈显著正相关，但与HDL及其亚类无相关性（P >0.05）。建立了LC/MS/MS测定HDL介导的巨噬细胞胆固醇流出的方法，方法精密、安全性好。健康志愿者研究发现胆固醇流出率与FERHDL（P<0.01），体重、体重指数（BMI）、收缩压、舒张压（P<0.05）等呈显著负相关，与apoAI、HDL2C显著正相关（P <0.01）。冠脉造影患者研究未发现细胞胆固醇流动与冠心病的关系，可能与样本组成和降脂治疗有关。.综上所述，本项目建立了HPLC测定血清-巨噬细胞间胆固醇净流动和LC/MS/MS测定HDL介导的细胞胆固醇流出的方法。方法不使用同位素，安全、简便，精密度好。细胞胆固醇流动与流出与多种CVD危险因素密切相关，有望为血清-巨噬细胞间胆固醇流动研究提供方法学基础。