基于PI3K-AKT通路探讨黄蜀葵花总黄酮对后肢缺血损伤治疗作用机制

Ischemic injury disease is a common clinical disease and refractory disease, disability and death rate is high, seriously affecting the patient's health and quality of life, western medicine has no good treatment. Promote angiogenesis is the core in the treatment of ischemic damage, the VEGF mediated PI3K-AKT is thought to play an important role in angiogenesis. Total flavone of Abelmoschus manihot (TFA) is the effective composition of Abelmoschus manihot, as the preparation of the hospital has been used in clinical trials in the long-term treatment disease of lower extremity ischemia injury and have achieved excellent therapeutic effect. This study intends to establish experimental rat model of hind limb ischemia, through the method of in vitro and in vivo animal experiment of cytology, by Westernblot, flow cytometry and comprehensively the TFA in promoting proliferation, vascular endothelial cell differentiation, antioxidant and inhibits endothelial cell apoptosis as determined, the action mechanism of TFA through the research of PI3K-AKT signaling pathway the downstream signal molecules. This study provides targets and new research ideas disease treatment of ischemic injury, and provide support for the new theory to the modernization of traditional Chinese medicine TFA.

缺血性损伤疾病是临床常见病和难治疾病，致残致死率高，严重影响着病患的身体健康和生活质量，西方医学对此并无较好的药物治疗手段。促进血管新生是目前治疗缺血性损伤的核心，VEGF介导PI3K-AKT被认为在血管新生中起重要作用。黄蜀葵花总黄酮（TFA）是黄蜀葵花的有效成分，作为本院的院内制剂在长期的临床实验中一直被用来治疗下肢缺血损伤疾病并取得了优异的治疗效果。本研究拟通过建立后肢缺血的大鼠实验模型，通过体外细胞学及体内动物实验的方法，通过Westernblot，流式细胞技术全面TFA在促进血管内皮细胞增殖，分化，抗氧化及抑制内皮细胞凋亡方面的作用，通过对PI3K-AKT信号通路上下游信号分子的研究确定TFA的作用机制。本研究为治疗缺血损伤疾病提供新的作用靶点及研究思路，同时为TFA的中药现代化提供新的理论支持。

项目背景：缺血性损伤疾病是临床常见病和难治疾病，致残致死率高，严重影响着病患的身体健康和 生活质量，西方医学对此并无较好的药物治疗手段。促进血管新生是目前治疗缺血性损伤的核心，VEGF介导PI3K-AKT被认为在血管新生中起重要作用。黄蜀葵花总黄酮(TFA)是黄蜀葵花的有效成分，作为本院的院内制剂在长期的临床实验中一直被用来治疗下肢缺血损伤疾病并取得了优异的治疗效果。本研究为治疗缺血损伤疾病提供新的作用靶点及研究思路，同时为TFA的中药现代化提供新的理论支持。.主要研究内容：1.建成后肢缺血大鼠模型，观察黄蜀葵花总黄酮对实验动物血液中调节性T细胞流式情况，缺血损伤组织中TNF-α表达水平，后肢缺血组织H＆E染色，后肢缺血组织马森氏染色，凋亡相关基因bcl-2，Bax和Bak，Caspase-3、caspase-9蛋白水平。2.通过鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验，进一步观察TFA对血管新生影响的载体，观察TFA对鸡胚绒毛尿囊膜模型血管生成的作用。3..建立人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）模型，观察黄蜀葵花总黄酮对HUVECs增殖、迁移、管腔形成等影响，从这些血管生成过程中的关键环节来探讨黄蜀葵花总黄酮的促血管生成作用。然后运用RT-qPCR和Western Blot等实验方法，结合特异性的PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002干预对比，进一步从影响血管新生的关键信号网络VEGF-A/VEGFR2-PI3K/Akt探讨黄蜀葵花总黄酮促血管生成的分子机制。.重要结果：黄蜀葵花总黄酮可以保护内皮细胞免受凋亡信号的影响，促进内皮细胞的增殖和分化，进而达到血管新生的目的，对缺血组织的损伤具有保护作用。关键数据及其科学意义：模型组、黄蜀葵花总黄酮低剂量组和高剂量组血液中调节性T细胞的数较正常对照组明显下降，差异具有统计学意义（TFA高剂量组P＜0.05，模型组和TFA低剂量组P＜0.01）；黄蜀葵花总黄酮低剂量组血液中调节性T细胞的数与模型组比较，无统计学差异（P＞0.05）；黄蜀葵花总黄酮高剂量组血液中调节性T细胞的数与模型组比较显著升高，具有统计学差异（P＜0.01）。