猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性变异株、经典株感染后宿主靶细胞差异表达基因的鉴定与功能分析

自2006年至今，我国大面积流行着高致病性猪蓝耳病，较以往相比，其病原(PRRSV)的致病性显著增强，但目前对于增强的机制尚一无所知。在证实高致病性猪蓝耳病病毒特征性的缺失与致病性无关之后，从宿主机体对病毒的应答方面入手展开研究，是十分有效可行的。本研究选用高致病性变异株、经典株分别感染宿主靶细胞，构建不同致病性PRRSV感染后靶细胞的消减杂交文库，得到宿主靶细胞在不同致病性PRRSV感染后所产生的不同的基因表达谱。这些差异表达的基因是机体受不同致病性PRRSV诱发所表达的基因，是病毒致病的分子基础。差异表达基因经Southern-blot和Real-time PCR等方法鉴定后，进行基因功能的注释与分析。选取其中若干基因进行人为地干扰其表达，观察基因的表达上调或下调对PRRSV复制的影响，以及对宿主靶细胞内其他蛋白的影响。本研究结果将为PRRSV致病机制的研究提供线索与思路。

2006年以来，我国大面积流行着高致病性猪蓝耳病，与以往相比，其病原(HP-PRRSV)的致病性显著增强，但对其增强机制尚一无所知。在证实HP-PRRSV NSP2蛋白缺失与致病性无关之后，从宿主机体对病毒的应答方面入手展开研究，是十分有效可行的。本研究选用高致病性变异株感染宿主靶细胞，利用抑制消减杂交技术，分析宿主靶细胞在PRRSV 感染后所产生的不同的基因表达谱。差异表达基因经Southern-blot鉴定后，进行基因功能的注释与分析。主要有3类基因发生了变化，即代谢酶类基因、免疫相关基因和细胞信号类基因发生了变化，三者累计约占差异基因总数的75%。选取其中MX1、HSP70以及IL-8等基因进行Western blot、ELISA和Real-time PCR验证。在此基础上，利用2D-DIGE结合质谱技术，分析高致病性PRRSV、经典PRRSV分别感染细胞的差异表达蛋白，其中与经典株相比，高致病性PRRSV感染后细胞中的膜联蛋白Annexin表达升高。通过对差异蛋白可能参与的信号通路进行分析，为今后深入研究PRRSV致病机制提供线索与思路。在青年基金的资助下，已毕业研究生3名，在读研究生2名，1人获得中国免疫学青年学者奖，发表SCI论文4篇。