一个新的肝纤维化相关分子OPN在TGF-β1介导的肝纤维化中的分子机制研究

肝硬化是临床常见的终末期肝病，其主要病理过程在于纤维化过程的不断进展。TGFβ1是公认的促进肝纤维化发生的关键因子，但其具体信号通路和和中介分子还需要进一步的研究和明确。我们发现骨桥蛋白OPN不仅是肝癌的预后标志物，而且在肝硬化患者血清中的表达水平和患者临床特征高度相关。对过表达OPN的基因芯片结果进行再分析发现：OPN能上调多个胶原相关基因的表达。在大鼠上的研究证实OPN能促进肝星状细胞HSC的活化并上调TGFβ1受体的表达，而TGFβ1又能上调OPN的表达。以上证据表明OPN可能是TGFβ1关键的下游分子，两者之间存在一个正反馈环路，共同介导了肝纤维化的发生。本研究在上述基础上，从信号转导的角度探讨TGFβ1调节OPN表达的机制、OPN促进肝纤维化发生的机理以及OPN介导TGFβ1促进肝纤维化的分子基础。对OPN的深入研究有可能为肝纤维化的逆转及分子机制研究提供新的干预靶点。

肝纤维化是细胞外基质产生与降解失衡导致的细胞外基质堆积，各种慢性肝损伤因素均可导致肝纤维化。严重的肝纤维化临床诊断为肝硬化，如果缺乏有效的干预措施，可向肝脏衰竭，甚至肝癌进展。. 本研究的目的为研究OPN在肝硬化患者组织和血浆中的表达；探讨其促人肝星状细胞活化机制，尤其是在TGF-β1介导的肝纤维化中所起的作用。. 免疫组化结果显示，肝硬化组织中OPN表达阳性率显著高于正常对照，同时OPN表达强度与Child-Pugh分级、MELD评分和并发症发生具有相关性。肝硬化患者血浆中，OPN与TGF-β1的表达量呈正相关。. 经慢病毒介导，过表达/干涉人肝星状细胞系LX-2中OPN的表达。通过qPCR、western blot检测细胞中OPN表达情况，结果证实慢病毒过表达/干涉有效。.为探讨OPN过表达/干涉对人肝星状细胞系LX-2活化表型的影响，我们通过CCK8检测、qPCR技术在人肝星状细胞系LX-2中，观察LX-2增殖及活化标志物的变化。结果显示，OPN上调可促进LX-2增殖，促进肝星状细胞活化标志物（α-SMA, Collagen I, TIMP1）的表达，OPN下调则导致相反结果。. 为进一步明确OPN在肝纤维化情况下上调的机制，我们着重研究TGF-β1在人肝星状细胞系LX-2中对OPN的转录调控。我们构建了OPN启动子载体，结合生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验研究OPN上游转录调控机制。结果显示，OPN可受到TGF-β1的正性转录调控。结合生物信息学分析和以往发表文献，锁定转录因子RUNX2作为研究对象。结果显示，TGF-β1可上调转录因子RUNX2表达，而RUNX2可增强OPN启动子活性，且结合生物信息学分析和启动子截短分析，初步确定RUNX2作用位点位于启动子序列的-78~-73的ACCACA。. 综上所述，我们得到以下结论：1、OPN在肝硬化组织中主要表达于肝细胞胞浆，表达高于正常对照，且与肝硬化严重程度相关。2、血浆中的OPN含量与TGF-β1呈正相关，提示其分子作用机制可能涉及TGF-β1通路。3、OPN可促进人肝星状细胞活化，发挥了促纤维化作用，有望成为抗纤维化的治疗靶点。4、OPN可被TGF-β1上调且受到TGF-β1下游转录因子RUNX2的正向调控，说明OPN参与了TGF-β1介导的肝纤维化。