肿瘤引流淋巴结和前哨淋巴结中T细胞免疫状态与结直肠癌预后关系的研究

The recent researches demonstrate that the number,type and location of tumor immune infiltrates in colorectal tumors(CRC) has a prognostic value that may be superior to the routine clinicopathological prognostic factors. The tumor draining lymph node (TDLN)is the major orgon that initiate the antitumor immune responses and closely related with cancer metastasis. The sentinel lymph node(SLN) is the first TDLN where the cancer cells metastasize to.So, the immune status of TDLN and SLN should be more correlated with cancer progression. Our previous study showed that the frequency of Tregs in TDLNs was more correlated with disease stage in CRC. In this project, we will analyze the distribution and function of T cell subpopulations in TDLN and SLN by using the methods of immunohistochemistry,flow cytometry and functional assays, and collect clinial data.The relationship between the immune status of T cell subpopulations in the TDLNS and the biological behaviors and prognosis of CRC will be analyzed by combinatino with clincial data. The aim of the staudy is to establish a new prognosis assessment system based on the immune ststus of TDLN,and also to evaluate it's clinical significance.That will have great academic significance and practical value .

最近的研究结果显示，结直肠癌（CRC）组织中浸润淋巴细胞（TIL）的表型、密度和分布部位比临床上常用的组织病理学指标有更大的预后价值。已知肿瘤引流淋巴结（TDLN）是机体启动抗肿瘤免疫反应的场所，且与肿瘤转移密切相关，前哨淋巴结(SLN)是最早接受肿瘤转移的TDLN。因此，TDLN 和SLN的免疫功能状态与肿瘤进展之间的关系可能更为密切，我们前期研究结果也表明，TDLN中的Treg细胞的比例与结直肠癌的病理分期更相关。本课题运用免疫组化、流式细胞技术和淋巴细胞免疫学功能实验，分析CRC引流淋巴结T淋巴细胞亚群的分布和免疫学功能，结合患者的临床病理及随访资料，研究CRC引流淋巴结免疫微环境对机体抗肿瘤免疫反应的调控作用，以及与CRC生物学行为及预后的关系，建立以淋巴结免疫学状态为指标的CRC预后评估体系，并评价其临床应用价值。这既有较大的科学意义，又具有较大的实用价值.

最近的研究结果显示，结直肠癌（CRC）组织中浸润淋巴细胞的表型、密度和分布部位比临床上常用的组织病理学指标有更大的预后价值，说明肿瘤局部免疫微环境的免疫状态对结直肠癌术后的复发、转移以及患者的远期生存具有重要作用。区域淋巴结是机体免疫系统中T细胞最早接受肿瘤抗原刺激,从而启动抗肿瘤免疫反应的场所,也是肿瘤最常出现的转移部位,它在激发抗肿瘤免疫反应、抵御肿瘤转移中起关键作用，所以区域淋巴结的免疫功能状态与肿瘤进展之间的关系可能更为密切。所以，我们利用免疫组化、流式细胞技术和淋巴细胞免疫学功能试验，研究了引流淋巴结T细胞亚群的分布和免疫学功能及其与肿瘤发展的关系，研究结果表明：（1）淋巴结内PD-1+CD8T细胞的比例显著低于肿瘤组织，但是这群细胞却具有较强的细胞因子分泌和杀伤能力。而在肿瘤组织中，PD-1的表达与CD8T细胞分泌细胞因子的能力呈负相关（2）无论是在淋巴结还是在肿瘤组织中，PD-1+Tim-3+CD8T细胞分泌IFN-γ等细胞因子的能力受到明显损伤。说明分子Tim-3也可以调控CD8T细胞的功能，由于PD-1+Tim-3+CD8T细胞在淋巴结中比例非常低，所以淋巴结中PD-1+CD8T细胞整体显现出更强的分泌细胞因子的能力。（3）通过免疫组化染色分析，我们发现淋巴结中B7-H1的表达水平显著性地低于肿瘤组织，提示由于淋巴结中缺少B7-H1的表达，所以PD-1+CD8T细胞的功能没有受到损伤。（4）我们通过检测一些受B7-H1/PD-1信号通路影响的TCR早期信号转导分子的变化来探讨淋巴结中PD-1+CD8T细胞功能没有损伤的分子机制。结果显示淋巴结中PD-1+CD8T细胞ERK的磷酸化水平显著高于肿瘤组织，表明淋巴结中PD-1的表达并没有抑制CD8T细胞内的ERK级联反应通路，进而抑制CD8T细胞的功能。