Th1/Th2/Th17/Tregs免疫平衡在母猪子宫内膜炎感染中的调控作用研究

Sows endometritis is a common reproductive disorder disease in large-scale pig farms. It is the main cause to cull sows non-physiologically due to high incidence rate and low cure rate. The latest research shows that the immune balance of the T helper cell (Th cell) subsets (Th1/Th2/Th17/Tregs) plays an important role in regulation of the immune system, which has a direct effect on the occurrence and outcome in local or systemic inflammation. There are no reports regarding the immune dynamic balance state of the Th cell subsets in SM.In this research, a SM model will be developed and flow cytometry and ELISA methods will be used to study the rules of the immune balance of Th cell subsets and their related cell factor in different time points; Gene chip technology will be performed to obtain the profiling of differentially expressed genes in uterine wall; To validate the differentially expressed genes related the immune balance, real-time PCR and immunohistochemisty will be used , respectively.The regulation pathyway of these differentially expressed genes and subsets of CD4+T cells will be studied preliminarily. This research will firstly explore the accurate regulation mechanism of the immune system in SM from immune balance. These results will provide theoretical support for the scientific control of SM.

母猪子宫内膜炎（SM）是规模化猪场常见的繁殖障碍性疾病，该病发病率高，治愈率低，已成为母猪非生理性淘汰的主要原因。最新的研究表明辅助性T细胞(Th)各亚群（Th1/Th2/Th17/Tregs）的免疫平衡在免疫系统的精细网络调控中发挥重要作用，其对机体局部或全身炎症反应的发生和转归产生直接影响。对于SM感染过程中Th细胞各亚群的免疫动态平衡状态及其调控机制还未有报道。本研究将建立SM模型，采用流式细胞术、ELISA方法研究患病母猪不同时相Th细胞各亚群及相关细胞因子的免疫平衡状态变化规律；采用基因芯片技术来揭示子宫壁局部免疫平衡相关基因表达谱的差异，并采用免疫组化和定量PCR等方法对差异表达基因进行验证；初步开展CD4+T各亚群及其相关差异表达基因的调控研究，探究其对SM感染的影响。本研究首次从免疫平衡角度来系统的探究SM感染过程中的免疫网络的调控机制，其结果将为科学防治SM提供理论支撑。

项目组严格按照本青年基金的研究计划，开展了本基金的各项研究内容。目前已按计划完成了本青年基金的研究内容。三年来，完成的主要工作如下：. 1）采用细菌培养分离和16S rDNA序列分析技术从子宫内膜炎患病母猪子宫内分离和鉴定了一株猪源致病性的大肠埃希菌和一株金黄色葡萄球菌；. 2）利用大鼠双子宫角的特点，成功建立了大鼠同体实验和对照子宫内膜炎模型，并对模型子宫进行了病理学切片观察和分析；. 3）采用细胞因子芯片技术检测了子宫内膜炎特异性表达的27种关键性免疫调控相关的细胞因子的变化，发现白细胞趋化因子（CINC- 1、CINC-2、CINC-3）、脂多糖诱导的CXC趋化因子（LIX）四个指标极显著性（p＜0.01 ）升高，白细胞介素-1a（IL-1a）显著（p＜0.05）升高，而其它细胞因子的差异不明显 。从这些细胞因子的表达变化分析，主要是以白细胞趋化因子类在子宫内膜炎中发挥了重要作用。.4）项目的前期研究结果，发现白细胞趋化因子在子宫内膜炎中的具有重要作用。机体无法有效的抑制病原体诱导的白细胞趋化因子，造成炎症反应失控可能是导致子宫内膜炎的主要原因。在病原微生物早期及时、快速的抑制炎性因子导致的瀑布式级联炎症反应才是防治子宫内膜炎的关键。基于这一认识，筛选抑制白细胞趋化因子的药物来进行母猪的防治子宫内膜炎防控实验。发现维生素C、白藜芦醇等抗氧化剂能够较好的抑制白细胞趋化因子的作用，有助于在炎症初期抑制子宫内膜炎症的瀑布式级联炎症反应，从而防止过度的炎症反应。根据这一发现，采用维生素C、白藜芦醇等药物进行了母猪子宫内膜炎的防控实验，发现白藜芦醇和维生素C均对子宫内膜细胞的脂多糖诱导的CXC趋化因子（LIX）具有明显的抑制作用。二者的联合应用对于产后母猪的子宫内膜炎具有良好的防控效果。目前该方法已经申请国家发明专利。.在本基金的资助下，我们共发表科研论文2篇，其中SCI论文1篇，申请国家发明专利1项，培养毕业硕士研究生1名。完成了本青年科学基金的预期成果产出。