连环蛋白p120在内毒素诱致肺血管内皮细胞凋亡中的作用及机制研究

脓毒血症是急性肺损伤最常见的致病因素。细菌内毒素导致的肺血管内皮细胞凋亡是急性肺损伤及多脏器功能衰竭发生发展的重要环节，然而内源性调节细胞凋亡的分子机制尚不清楚。传统认为内皮细胞连环蛋白p120主要调节内皮细胞间连接和血管通透性，最近我们的研究首次表明p120对内毒素诱致的肺炎症性损伤具有显著的抑制作用，这种作用是通过调节Toll样受体-4（TLR4）来实现的。在此基础上我们的预实验结果表明p120可能对内毒素诱致的肺内皮细胞凋亡有重要的调节作用。本课题将从离体细胞培养及整体动物实验水平，采用分子生物学方法全面系统地探讨p120在脓毒血症诱致的肺血管内皮细胞凋亡中的作用。本课题的完成将阐明内毒素诱致内皮细胞凋亡的新的调节机制，从而为临床上脓毒血症所致急性肺损伤的治疗提供新的思路和方向。

本课题主要针对连环蛋白p120在内毒素诱致肺内皮细胞凋亡中的作用及机制进行了研究；我们发现p120基因下调可明显加重LPS联合放线菌酮（CHX）诱致的大鼠肺微血管内皮细胞（RLMVECs）凋亡效应蛋白Caspase-3活化，而p120过表达可明显抑制该现象，证明p120在LPS/CHX引起的RLMVECs凋亡中具有重要的保护作用；进一步研究发现，p120下调明显增加了LPS/CHX刺激引起的Bax由胞浆向线粒体的转移，以及细胞色素c(cyto-c)自线粒体的释放，说明p120对LPS/CHX引起的内皮细胞凋亡的内源性途径具有负向调节作用；机制研究发现，p120可以抑制LPS/CHX引起的内皮细胞蛋白激酶R（R）下游的真核起始因子2α（eIF2α）的活化，而PKR基因下调阻断了LPS/CHX刺激引起的caspase-3活化，而且在p120/PKR同时基因下调组，LPS/CHX刺激后p120基因下调导致的caspase-3活化明显受到抑制；综合上述研究结果，p120通过对PKR/eIF2α通路的抑制负向调节内毒素所致肺内皮细胞内源性凋亡。. 我们还对p120在内毒素诱致的肺炎性损伤中的作用及机制进行了进一步研究。我们发现p120基因下调使LPS介导的三种丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）的激活明显增强，p120过表达则对LPS介导的三种MAPK（JNK, ERK1/2 及p38）的激活具有明显的抑制作用；机制研究证实p120主要通过抑制p38和JNK的活性来抑制LPS介导的细胞间粘附分子（ICAM-1）的表达、PMN内皮粘附和跨内皮迁移（TEM）。. 此外，我们还对p120在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱致的肺炎性损伤中的作用及机制进行了初步研究。我们发现，TNF-α激活内皮细胞的同时降低p120的表达，而p120下调则加重了TNF-α介导的内皮细胞激活；机制研究初步证实p120通过抑制NF-κB活化，在TNF-α介导的内皮细胞激活及随后的肺炎性反应中起重要的保护作用。. 本课题研究结果目前已投稿SCI论文两篇，发表国内核心期刊论文一篇（山东大学学报医学版）。