猪传染性胃肠炎病毒感染与细胞脂筏关系的研究

传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染可导致仔猪严重腹泻和死亡。TGEV感染依赖于病毒与细胞受体结合以及病毒囊膜与细胞膜的融合。脂筏(lipid rafts)是细胞膜上富含鞘脂和胆固醇的微区结构。病毒可利用脂筏侵入宿主细胞,进行组装和出芽。脂筏的胆固醇在病毒感染中意义重大。本实验利用激光共聚焦免疫荧光技术共定位脂筏标记物与TGEV受体(pAPN)在细胞膜的表达。通过蔗糖密度梯度离心分离细胞脂筏，用pAPN特异性抗体进行免疫印迹分析pAPN与脂筏关系。再利用药物改变TGEV和细胞胆固醇含量，分析脂筏对病毒与细胞结合的影响。通过改变经唾液酸酶处理的细胞的胆固醇，分析脂筏对TGEV细胞感染的重要性。并用real-time PCR在转录水平上进行证实实验。最后在病毒进入细胞后再消耗细胞膜胆固醇，在不同时间点滴定细胞上清中的病毒，分析细胞脂筏对病毒释放的影响。通过本研究明确TGEV感染与细胞脂筏的关系。

传染性胃肠炎病毒(TGEV)可导致仔猪严重腹泻和死亡，是危害养猪业的重要病毒之一。TGEV通过与细胞受体结合介导感染。 脂筏(lipid rafts)是细胞膜上富含胆固醇的微区结构，与部分病毒侵入宿主细胞,组装或出芽相关。本项目利用多种生化分析方法共定位脂筏标记物与TGEV受体(pAPN)在细胞膜的表达。通过蔗糖密度梯度离心分离细胞脂筏，用pAPN特异性抗体进行免疫印迹分析pAPN与脂筏关系。并通过改变TGEV和细胞胆固醇和唾液酸含量，分析了脂筏对病毒与细胞结合的影响。利用病毒噬斑实验和定量PCR进一步分析了细胞脂筏对病毒释放的影响。本研究明确了TGEV感染与细胞脂筏的关系，为深入理解TGEV感染机制提供了重要实验数据。项目按计划实施，完成了预期目标，在SCI收录期刊如Virology, Antiviral Research, PLoS One等发表论文多篇，培养毕业研究生6名，获省科技奖励（自然科学类）二等奖及教育部新世纪优秀人才项目各一项。