NEDD9在肝癌侵袭转移中的作用及相关机制

肿瘤干细胞与肿瘤转移、复发关系密切。我们前期研究发现"肝癌干细胞样细胞"特征性基因表达谱与肝癌转移、复发密切相关。其中神经前体细胞发育下调因子9（NEDD9）是该特征性基因表达谱中的一个关键分子，近期研究发现它与肿瘤发生、发展和转移关系密切，目前在肝癌中尚未有报道。本课题：①利用qRT-PCR和Western blot检测NEDD9在肝癌细胞系和肝癌组织中表达；②利用基因转染、RNAi、慢病毒载体系统等方法结合裸鼠肝癌模型在体内外观察NEDD9在肝癌细胞侵袭转移过程中的作用；③利用基因芯片比较干扰和过表达前后基因水平的分子改变，qRT-PCR、Western blot和免疫共沉淀在细胞和临床标本中进一步验证，了解NEDD9参与肝癌转移、复发的分子机制；④利用临床肝癌组织芯片来研究NEDD9表达与肝癌临床特征及术后转移、复发的关系，探讨其作为临床预后分子标签的可能性。

本课题原定研究目标为：1. 阐明NEDD9在肝癌侵袭转移中的作用及相关分子机制；2. 阐明NEDD9表达与肝癌临床特征及预后的相关性，探讨作为复发/转移分子标记 的可能性。课题执行情况顺利，原定目标全部完成。主要研究成果如下：通过检测NEDD9 在不同转移潜能的肝癌细胞系中的表达情况，发现肿瘤细胞系中都可检测到NEDD9表达，NEDD9 表达水平与转移潜能成正相关。siRNA 技术下调肝癌细胞株NEDD9表达，我们发现NEDD9 能够影响细胞的增殖、细胞运动、体外侵袭和异位生长能力。利用慢病毒载体系统构建完成过表达NEDD9的载体和shRNA载体，构建稳定细胞株，结果表明NEDD9可能通过影响细胞骨架的重排，来促进细胞粘附和侵袭，同时，可以通过影响ErK磷酸化从而促进肿瘤细胞的增殖，pull down实验发现NEDD9过表达可以明显促进Rac1和CDC42基因的活性。裸鼠体内实验表明过表达NEDD9后可以明显促进裸鼠肿瘤的生长，促进肺转移，而干扰NEDD9表达后，可以明显抑制肿瘤的生长及肺转移。基因芯片等技术筛选在过表达及抑制NEDD9后肝癌细胞中差异表达的基因谱，利用生物信息学分析发现NEDD9 主要通过影响细胞的粘附等信号通路来促进肿瘤的侵袭和转移，其中的关键基因是PTHLH，免疫共沉淀和启动子荧光素酶报告实验表明NEDD9可以和PTHLH的启动子结合调控它的表达，而我们抑制PTHLH分子表达后我们发现NEDD9对肿瘤细胞运动、侵袭及增殖的影响明显减弱。最后，我们在403例肝癌组织芯片中检测了NEDD9的表达，NEDD9 可应用于高复发风险肝癌患者的筛选，作为指导临床肝癌诊疗的参考指标，从而改善肝癌的总体疗效。