HBV感染转归与免疫应答相关分子标志物的关联研究

The prognosis is different in patients infected with Hepatitis B virus (HBV). The diversity is associated with viral factors, environmental factors and host genetic factors, including the polymorphism of host related genes. HBV viral infection is cleared by the innate and acquired immune responses mediated by cytokines, cytokine receptors, Toll-like receptors (TLRs), and human leukocyte antigen (HLA) that involved in the virus recognition, antigen processing and presentation, as well as immune regulation. Numerous studies have confirmed that polymorphisms of these genes were associated with the outcome of HBV infection and the immune response, but lack systematic data analysis based on high-throughput sequencing from large samples. In this study, we will conduct multi-targeted gene sequencing on NGS platform in Chinese population infected w/without HBV infection. The related gene sequencing and analysis will find genetic polymorphisms associated with HBV infection and immune response, and provide evidence of establish methods and protocols in HBV infection risk assessment, early diagnosis and prognosis. We hope our study will help personalized treatment for HBV infected patients.

乙型肝炎病毒（HBV）感染患者的转归存在个体差异，其中宿主相关基因的多态性是其内在影响因素之一。HBV感染后的病毒清除是通过先天免疫和获得性免疫应答介导的，细胞因子、细胞因子受体、Toll-like受体（TLR）、以及人类白细胞抗原（HLA）参与了病毒识别，抗原加工与呈递，以及免疫调节，已有大量研究证实这些基因的多态性与HBV感染后的转归及免疫应答有关联，但国内外还缺乏基于高通量测序的大样本系统性的数据分析。本研究旨在前人研究获得的单一基因分子标志物阳性结果基础上，采用分子流行病学病例对照研究方法，通过新一代测序技术平台（NGS）对中国人群HBV感染患者免疫应答相关分子标志物多基因联合进行全长测序分析，筛查中国人群HBV感染与免疫应答相关分子标志物的关联性，为建立适用于中国人群HBV感染风险评估、早期筛查及预后判断的分子生物学标准和方法提供有力证据，寻找潜在个体化治疗的靶点。

背景：乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus， HBV）感染是一项严重的公共卫生问题，HBV感染转归与宿主的基因型密切相关，基于全基因组关联研究（GWAS）也已经发现了一些位点，高通量测序已经开始被应用找寻HBV感染相关疾病的遗传基础，且已经开始被用于慢性乙型肝炎（CHB）研究中。为了确认HBV感染转归与免疫应答相关分子标志物的关联，我们综合研究了细胞因子和免疫应答相关基因在慢性乙型肝炎转归中的变化。.方法：共征集了慢性乙型肝炎（CHB）患者53例，肝细胞癌（HCC）患者53例，自愈（clearance）53例，同时纳入53例正常人为健康对照（control）组，对细胞因子、细胞因子受体、Toll-like受体（TLR）、以及人类白细胞抗原（HLA）、TLR家族基因包括TLR1-10等共404个基因进行了超高深度的测序（大于900倍覆盖），检测突变，并进行疾病相关分析。.结果：1、在与肝癌的分析中，11个基因均发现突变位点，共计39个，其中34个来自于之前报道过的HLA基因，发现5个新的差异显著（P值小于0.05）的位点， (rs579876, rs579877, rs368692979, NM_145007:c.*131_*130delTG, .NM_139165:exon5:c.623-2->TT) 来自于REAT1E, NLRP11, HCAR2基因。.2、在慢性乙肝的分析中，32个基因发现突变位点，共计54个，其中29个来自于HLA基因，几个错义突变包括p.E226K in PVR (poliovirus receptor), p.E400A and p.C431R in IL4R (interleukin 4 receptor)，4个突变位于3’UTR (untranslated region)。.3、对TLR家族基因进行了深入研究均发现突变位点，共计164个，发现三个差异显著（P值小于0.05）的位点，其中，TLR1基因的rs143576719位点，可能是一个肝癌的保护性突变，TLR5基因结构域的功能突变p.N592S，可能在HBV感染相关的肝病中可能扮演着重要的作用，同时发现TLR10基因的突变rs4274855，肝癌病人较健康对照频率明显降低（P值小于0.05），慢性乙肝较自愈组明显降低（P值小于0.05），说明该突变极可能是保护性的。