氯吡格雷非P2Y12依赖的抗血小板机制研究

Cardiovascular and cerebrovascular diseases are the main cause of death all over the world. Antiplatelet drugs are important treatment for thrombotic diseases. Clopidogrel is most prevailing drug for antiplatelet therapy. Although its efficacy and safety have been testified during clinical application, there are still many bleeding occurrences. Therefore, the antithrombotic mechanisms of clopidogrel are still worthy of further exploration. Clopidogrel treatment leads to an increased blood loss in P2Y12-deficient mice. In addition, we have observed that clopidogrel inhibited platelet aggregation induced by high concentration of PAR4 ligand AYPKGF, which activates platelets independent of P2Y12, suggesting clopidogrel may have a non-P2Y12-dependent antiplatelet mechanism. By using P2Y12 deficient mice and PAR4-CHO-K1 cell line, We plan to clarify how clopidogrel and other thienopyridine drugs interact with PAR4 receptor on platelet membrane. In this study, We will clarify the non-P2Y12 dependent mechanisms of clopidogrel in antiplatelet therapy, elaborate the off-target effects of clopidogrel, and more precisely predict the bleeding risk of clopidogrel in antithrombotic therapy.

目前心脑血管疾病仍然严重威胁我国人民健康，抗血小板药物是血栓性血管疾病重要治疗手段。氯吡格雷是抗血小板治疗中的常见用药，尽管随着临床研究的开展，其疗效和安全性都得到了显著地提高，但仍存在一定的出血风险，因此其抗血栓机制仍值得深入探索。目前研究发现：1)氯吡格雷能够导致P2Y12受体缺失小鼠出血量进一步增加；2)尽管高浓度AYPKGF（PAR4激活肽段）引起的血小板聚集不依赖P2Y12，氯吡格雷仍对该过程存在显著抑制。这提示氯吡格雷可能存在非P2Y12依赖的抗血小板机制。本项目拟利用P2Y12缺失小鼠和PAR4-CHO-K1细胞系，进一步探索血小板活化过程中PAR4受体与P2Y12受体间的相互作用，明确氯吡格雷抗血小板的多靶点作用方式，更好地指导其在抗血小板治疗中的应用。

目前心脑血管疾病仍然严重威胁我国人民健康，抗血小板药物是血栓性血管疾病重要治疗手段。氯吡格雷是抗血小板治疗中的常见用药，尽管随着临床研究的开展，其疗效和安全性都得到了显著地提高，但仍存在一定的出血风险，因此其抗血栓机制仍值得深入探索。前期研究显示氯吡格雷能够导致P2Y12受体缺失小鼠出血量进一步增加；尽管高浓度AYPKGF引起的血小板聚集不依赖P2Y12，氯吡格雷仍对该过程存在显著抑制。在本项目中，我们发现未转染的CHO细胞对ADP和AYPGKF不具有反应性，通过质粒将PAR4受体或P2Y12受体转入CHO细胞后，可以很好模拟PAR4受体，P2Y12受体在细胞内的功能，并且转染了受体的CHO细胞应对相应刺激时呈现浓度依赖作用。通过利用纯化的氯吡格雷代谢产物和大鼠灌胃方式，我们发现氯吡格雷能够浓度依赖的抑制PAR4受体引起的细胞内钙流和血小板活化。氯吡格雷代谢产物能够显著降低PAR受体刺激AYPGKF和P2Y12受体刺激剂ADP引起的活化。这些数据，说明氯吡格雷的确存在对血小板PAR4受体具有抑制作用，且血小板活化过程中P2Y12受体与PAR4受体存在密切相互作用。