钙通道蛋白(VGCCs)在循经高代谢特性中的作用机制

The material base of meridian hypermetabolic feature is one of the key factors on the mechanism of meridian.Based on the initial observation, we have observed the existence of a specific stripe of protein，which the molecular weight was approximately 210 kD in the meridian,and which in the meridian differ form the non-meridian tissue.We conjecture that the specific protein would be related with Calcium ion voltage door control channel protein (VGCCs,210-240 kD),which may be one of the key material base of ghypermetabolic characteristics of the meridian.In this study,living cells imaging technology will be used,And calcium ion, ring phosphoric acid adenosine and mitochondria imaging will be used as main detection index.We observe the indicators of imaging differences between the rat Stomach Meridian of Foot Yangming and the neighboring tissue,and then study the indicators of imaging changes before and after their acupuncture stimulation in order to prove the influence that acupuncture acts on metabolic activities; the indicators changes will be observed after we block the VGCCs and acupuncture the meridian,then the role of VGCCs on the meridian hypermetabolic will be observed; the specific protein in Yangming Foot Meridian and other tissue will be observed,and using proteomics technology,the molecular structure of VGCCs will be analysed.In this study,we will demonstrate that VGCCs is the key material base of meridian high metabolic feature,so as to explain and summarize previous research,to find a new way of the discovering meridian material base and mechanism.

经络循经高代谢特性的物质基础是揭开经络作用机制的关键因素之一。本研究基于我们前期工作观察到经与非经部位存在差异蛋白条带（210kD），推测其可能与Ca2+电压门控通道蛋白(VGCCs，210~240 kD)相关，VGCCs可能是形成经络循经高代谢特性的关键物质基础之一。本研究拟运用活体体内细胞成像技术，以Ca2+、cAMP和线粒体成像为主要指标，观察大鼠胃经与邻近非经部位的差异及其针刺前后的变化，以证实针刺对循经代谢活动的影响；观察药物阻断VGCCs后针刺效应的变化，试图证明VGCCs在循经高代谢中的关键作用；应用蛋白质组学技术，观察经与非经部位VGCCs的差异并分析其分子结构。以论证VGCCs是循经高代谢特性的关键物质基础假说，并探究其作用机制，为解释和整合既往研究成果提供依据，为进一步揭示经络物质基础和作用机制开启新途径。

前期研究发现大鼠足阳明胃经循经部位存在特异蛋白条带分子量（约为210KD）与电压门控钙通道蛋白分子量（VGCCs,210-240KD）相接近，本项目进一步研究了钙通道蛋白在循经高代谢特性中的作用机制，运用活体细胞荧光成像（在体细胞成像）技术观察针刺大鼠足三里穴位前后足阳明胃经股骨段循经部位（以下简称循经部位）与邻近非循经部位（以下简称非经部位）的钙离子成像、线粒体膜电位检测和cAMP成像的变化，以及维拉帕米阻断钙通道后针刺干预情况下的上述各指标的变化。结果如下：1.钙离子成像：① 循经部位Ca2+荧光强度高于非经部位；② 针刺后循经部位Ca2+荧光强度明显高于针刺前；非经部位针刺前后Ca2+荧光强度无明显变化；③ 维拉帕米局部阻断钙通道后，循经部位Ca2+荧光强度随时间逐渐下降，针刺后下降幅度降低；非经部位针刺前后未见明显变化。2.线粒体膜电位检测：① 循经部位聚合物荧光强度高于非经部位；② 针刺后循经部位聚合物荧光强度较针刺前增高；③ 维拉帕米局部阻断钙通道后循经部位聚合物荧光强度逐渐降低；3.cAMP成像：项目中cAMP成像部分经过图像分析，已有部分数据提示循经部位组织细胞cAMP成像较非经部位荧光强度高，针刺后循经部位cAMP成像较针刺前荧光强度增高；维拉帕米局部阻断钙通道后，循经部位cAMP荧光强度逐渐降低。项目研究结果表明电压门控钙通道与循经高代谢具有高度相关性。据此推测其作用机理及过程可能是：针刺经穴使循经部位细胞膜电位改变，导致电压门控钙通道开放，引起钙离子内流，使线粒体膜电位升高，从而激发线粒体的功能活动，加速ATP的生成与利用，cAMP的含量随之增加，这是形成高能量代谢的基本过程。同时，随着钙通道开放钙离子的进入，也引起细胞膜电位的变化，进一步引起相邻细胞的膜电位变化及钙通道开放，重复上述过程，形成各种循经感传现象及循经部位的高能量代谢状态。电压门控钙通道开放可能是针刺部位兴奋传导的启动环节，是针刺引起细胞膜及线粒体膜电位变化时形成高能量代谢及循经传导特异性的关键环节。为揭示循经传导特异性和经络实质的研究提供了新的思路和途径。