新型CD11c(+)Ia(-)树突状细胞亚群发现、鉴定及免疫调控功能的研究

本课题以加入白喉毒素(DT)后能短暂去除高表达CD11c DC的CD11c-DTR转基因鼠为研究模型，以发现的一群非B、非NK的，在CD11c-DTR鼠中能被DT去除的CD11c(+)Ia(-)DC细胞为研究基础，通过将DC前体、未成熟以及成熟DC分别过继到经DT处理的CD11c-DTR转基因鼠体内，流式检测CD45.1+细胞在不同时间表型的变化，确认CD11c(+)Ia(-)DC的来源是髓系细胞的正常发育，抑或由成熟DC发育而来；通过表型和特征分析，以及在体内、外功能的研究，明确此DC亚群的免疫或耐受的特性；研究其分化发育通过何种分子机制进行；在自免疫疾病模型中，检测引起的病理变化；并进一步探索在肝脏、肺脏以及淋巴结中类似细胞的研究。通过此项研究，一方面补充完善DC亚群的内容，另一方面建立通过CD11c-DTR转基因鼠寻找并鉴定细胞亚群来源和功能的方法。

由于在对原计划研究的过程中，国外发表了类似的文章，因此我们重新改换研究方向，对细胞跨膜蛋白CD47与自身免疫性脑脊髓炎的关系进行了研究。对原计划的内容，我们证实了CD11c(+)Ia(-) DC（树突状细胞）是一群未成熟的DC；新的项目证实了CD47敲除鼠对EAE具抗性，其机制是巨噬细胞的CD47通过NO影响炎性复合体导致IL-1β的产生，IL-1β通过与Th17细胞上的受体作用影响其迁移。CD47-Fc融合蛋白能预防和治疗EAE；现进行的实验明确了膀胱癌患者组织及不同分化程度的细胞株表达IRF7（干扰素调节因子），现正研究其在肿瘤发生及侵袭中的作用。具体内容如下：.（一）明确了CD11c(+)Ia(-)DC是未成熟的DC。通过细胞表面分子CD80、CD86和CD40的表达，细胞吞噬实验以及抗原递呈能力检测，明确了小鼠脾脏来源的细胞CD11c(+)Ia(-)DC具未成熟DC的特征。.（二）成功制作了小鼠EAE模型。诱导率能达到100%，保证了实验结果的准确，并为长海医院神经内科和浙江大学免疫研究所此模型的建立提供了帮助。.（三）明确了CD47KO（敲除）鼠对EAE具抗性。通过临床评分，HE，脱髓鞘实验，脾脏，淋巴结和中枢神经系统中的Th1/Th17细胞的数量及比例，确认了CD47敲除鼠不发生EAE。.（四）探讨了CD47 KO鼠对EAE具抗性的机制。首先通过骨髓重建和细胞过继回输等实验，明确了造血来源的淋巴细胞及Th17细胞本身影响了Th17细胞的迁移；然后通过体内外的研究，确认是IL-1β通过与Th17细胞上的IL-1R1影响了迁移；通过western blot等实验明确了CD47通过NO影响了炎性复合体进而影响了IL-1β的产生。.（五）探讨了CD47-Fc对EAE的预防和治疗作用。通过CD47-Fc融合蛋白竞争性抑制CD47，通过一系列指标检测，明确能明显减缓EAE的发病，并能降低EAE的发病程度。.（六）明确了膀胱癌组织和高分化细胞株高表达IRF7（干扰素调节因子）。通过对膀胱癌患者组织及不同分化程度的细胞株IRF7的表达检测，发现膀胱癌组织高表达IRF7，高分化程度的细胞株IRF7的表达也明显高于低分化的细胞株。通过病毒构建，拟探讨IRF7影响人膀胱癌病变的机制，以便为膀胱癌的治疗提供理论支持。