逍遥散对抑郁模型小鼠海马星形胶质细胞ATP释放的干预作用研究

The neurochemical theory of depression is "monoamine hypothesis", nowadays, the third generation antidepressants still follow this theory. However, there is no study on the intervention effect of Xiao Yao San on the release of astrocyte-derived ATP in nucleus of mice brain with depression. We have a hypothesis that the mechanism of Xiao Yao San against depression by the modulation of the release of astrocyte-derived ATP based on previous research work. In vivo, C57BL/6J mice and the same strain mice that AST function deficient mice(ItPr2-/- mice) to establish depression model by the chronic unpredictable mild stress. Study on the intervention effect of Xiao Yao San on ATP content, neurotrophic factor , neurotransmitter content, and protein and mRNA expression of neuronal marker, astrocyte marker and ATP receptor P2X2 in the mice hippocampus with depression. AST in mice hippocampus will be primary cultured, intervention effect of serum containing Xiao Yao San on the content of neurotrophic factor, neurotransmitter and ATP will be measured；AST marker and the mRNA and protein expression of ATP receptor P2X2 also will be tested. We wish this research can provide a new idea or new target to Xiao Yao San and other Chinese antidepressant medicines or prescriptions in future by combination of animal and cell cultured experiments.

有关抑郁症神经化学理论的“单胺假说”，直到当今的第三代抗抑郁药，依然遵循这一假说。但对于从非单胺类角度，以脑区核团星形胶质细胞（AST）来源的ATP释放研究逍遥散抗抑郁作用机理未见报道。结合前期工作基础，本项目提出“逍遥散治疗抑郁症的作用机理可能是干预了AST所释放的ATP”的假说。体内实验中采用C57BL/6J及其同品系AST功能缺失ItPr2-/-小鼠建立慢性不可预知温和应激抑郁模型，研究逍遥散对模型海马中ATP、神经营养因子和神经递质含量以及神经元标志物、星形胶质细胞标志物和ATP受体P2X2基因与蛋白表达的干预情况；体外原代培养小鼠海马AST，检测逍遥散含药血清干预前后神经营养因子、神经递质和ATP的含量，检测AST标志物以及ATP受体P2X2基因与蛋白的表达情况。通过动物与细胞实验相结合，将为逍遥散及其他抗抑郁类中药复方的作用机理研究提供一个新的思路或靶标。

逍遥散（XYS）是一种从中国宋代约公元前960-1127年就已经开始用于治疗抑郁症的中药复方，也是最常用的、最流行的治疗抑郁症的中药复方。逍遥散的治疗机制和抑郁症的病理生理机制已经研究了几十年，然而，这些研究只是对抑郁症和逍遥散抗抑郁作用机制进行了部分的理解。.在此项研究中，本项目旨在探讨“逍遥散治疗抑郁症的作用机理可能是干预了AST所释放的ATP”的假说。体内实验中采用C57BL/6J及其同品系Itpr2基因敲除鼠（Itpr2-/-小鼠）建立慢性不可预知温和应激抑郁模型进行正反验证，研究逍遥散对模型海马中ATP、神经营养因子和神经递质含量以及神经元标志物、星形胶质细胞标志物基因与蛋白表达的干预情况；体外原代培养小鼠海马AST，检测逍遥散含药血清干预前后ATP含量的变化。.作为研究人类抑郁症模型，采用慢性不可预知温和应激（CUMS）建立小鼠抑郁模型。此外，对于逍遥散抗抑郁作用机制对慢性不可预知温和应激引起的小鼠食量与体重，抑郁样行为如旷场试验（OFT），糖水偏好实验(（SPT）和强迫游泳试验（FST），新环境进食抑制实验（NSF）进行了测试。慢性不可预知温和应激（CUMS）后,小鼠呈现出抑郁样行为,体重减轻,运动能力下降和蔗糖偏好下降, 摄食异常,血清BDNF和GDNF含量减少,氨基酸类神经递质如Gln、Glu与Gly含量减少，谷氨酸含量增加, 谷氨酰胺含量减少, 谷氨酸/谷氨酰胺比值升高,GLT-1蛋白和mRNA表达下调,GLT-1平均光密度(AOD)降低, GFAP基因与蛋白表达下调，免疫反应性在海马区域中下降，ATP释放减少。药物干预后，逍遥散在治疗抑郁症时发挥出了与氟西汀类似的抗抑郁效果。基因敲除鼠反向验证前述结果，发现逍遥散的抗抑郁效应主要作用脑区是通过mPFC实现的，并且逍遥散的效果优于西药氟西汀。这为后期更好的指导临床用药与开展临床研究提供了一个思路。