抗猪囊尾蚴特异IgG4重组抗原的制备与应用研究

囊尾蚴抗原成分复杂是其免疫学检测时常与其它寄生虫发生交叉反应的根源。目前囊虫病免疫学诊断面临的最大问题是检测方法的特异性差，并且对抗囊疗效不能进行有效评价。最近的研究显示，猪囊尾蚴囊液抗原中的糖蛋白，尤其是小分子量（8-10kDa）的糖蛋白可能为猪囊尾蚴种特异性抗原，且刺激机体主要产生特异性IgG4，而后者当患者体内的囊尾蚴被药物杀死后能很快地降低或消失，能较好地反映囊尾蚴的感染状态。因此，本研究拟利用双向电泳和电转移技术从囊液抗原中筛选出与患者血清中特异IgG4结合的合适抗原位点（数个），对其进行质谱分析，根据氨基酸序列等进行BLASTP，寻找蛋白的保守序列，再根据密码子的兼并性设计兼并引物进行逆转录PCR，然后根据获得片段序列设计RACE引物，获得靶抗原全长的cDNA片段，再重组到表达载体PET-30a中表达与鉴定。最后优化联合重组蛋白做抗原用于免疫学检测，评价其应用价值。