NLK调控胆囊癌上皮间质转化（EMT）的机制研究

Gallbladder carcinoma (GBC) is the most aggressive malignancy of the biliary tract. GBC has an extremely poor prognosis because of its early metastasis. Epithelial-mesenchymal transitions (EMT) is an important biological process in which epithelial malignancies can obtain ability of invasion and metastasis. In our previous research, we identified that silencing Nemo-like kinase (NLK) expression by RNAi technique can change the level of EMT related proteins, which indicated that NLK was involved in the EMT process of GBC. We further screened that Paxillin is the interactive proteins of NLK by Yeast Two-Hybrid. Our previous data strongly suggested that NLK induces EMT in GBC cells through the interaction with Paxillin protein. In this project, we plan to investigate the functions and molecular mechanisms of EMT regulated by NLK and Paxillin via molecular biology, cellular biology and in vivo animal models. The completion of this project might contribute to clarify the molecular regulatory networks related to the metastasis in GBC, and provide the theoretical basis for developing the corresponding treatment strategies and improving the prognosis of patients with GBC.

胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤，早期发生侵袭转移是其预后差最主要原因。上皮间质转换（EMT）是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得侵袭转移能力的重要生物学过程。本课题组前期研究发现，利用RNAi技术沉默Nemo样激酶（NLK）可以使EMT相关蛋白表达水平发生变化，提示NLK参与了胆囊癌的EMT过程，进一步通过酵母双杂交实验，筛选出NLK的相互作用蛋白Paxillin。在此基础上，我们提出假设：NLK通过与paxillin蛋白相互作用后诱导了胆囊癌细胞发生EMT。针对于此，本项目拟通过分子生物学、细胞生物学及实验动物模型等手段，明确NLK蛋白与Paxillin蛋白的相互作用机制，揭示其在调控EMT及胆囊癌转移过程中的功能和相关分子的调控机制。通过阐明NLK功能和分子机制，可进一步深入对胆囊癌转移相关特征性的分子调控网络的理解，为下一步相应治疗策略的开发及改善胆囊癌患者的预后提供新的理论依据。

胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤，其侵袭能力强，易发生浸润转移，恶性程度高，预后极差。胆囊癌的侵袭转移是一个十分复杂的级联过程，其中有很多因素在不同的水平调控转移的发生发展。因此，研究胆囊癌的转移机制并筛选相关分子靶点，对于进一步改善胆囊癌的诊断和治疗水平具有重要意义。NLK在恶性肿瘤的发生、发展过程中也发挥重要功能。本项课题通过免疫组化及临床病理资料分析，发现NLK在胆囊癌组织中高表达，且其表达量与患者的组织学分化程度等有关。NLK高表达提示患者预后不良。敲减NLK基因后，胆囊癌GBC-SD细胞增殖、侵袭及转移能力均受到抑制。近年来研究表明，miRNAs参与多种肿瘤的侵袭转移过程并且是治疗的一个重要靶点。通过生物信息学分析，我们预测miR-31可能是调控NLK的上游因子，体内及体外实验表明，胆囊癌细胞转染miR-31后其增值及转移能力明显减弱。且miR-31能抑制TGF-β诱导的EMT相关反应。双荧光素梅报告基因实验证，miR-31可直接作用于NLK，影响Smad及MAPK/Erk信号转到通路的激活，抑制胆囊癌细胞的侵袭转移能力及EMT的发生。胆囊癌患者由于缺乏典型的症状，往往发现时已是晚期。而且，胆囊癌术后易复发转移，且目前胆囊癌对于常规的化疗药物不敏感，因此亟需探索胆囊癌化疗的新手段。Magnolol（厚朴酚）是一种广泛应用的中药，有着多种生理及药理作用。本项研究旨在探索Magnolol抑制胆囊癌增殖及转移的机制。研究显示，Magnolol能够下调NLK基因从而影响凋亡相关蛋白及基质金属蛋白酶表达，进而抑制胆囊癌细胞的增殖和侵袭转移能力，为胆囊癌的药物治疗提供了新方向。综上所述，NLK可能成为判断胆囊癌预后以及指导基因治疗的新靶点。