丙型肝炎病毒新型疫苗免疫保护机制的研究

Chronic hepatitis C virus(HCV) infection is a serious harm for the public health. Currently, the protection immunity of HCV is not clear and no HCV vaccine available for population. To determine the protection mechanism of HCV vaccine and effective immune response, we plan to first develop a novel surrogate HCV infection animal model based on recombinant adenovirus-associated virus(rAAV) of type 8 or lentiviral virus(rLV), both of which targeting to liver and carrying HCV target antigen connected with reporter coding gene; then we plan to evaluation of the efficacy of some HCV vaccine candidates using this animal model. Basically, we will character comprehensively the immune responses supplemented with the use of surrogate HCV infection animal models and various novel viral vector-based HCV vaccine candidates using different scheme, evaluate the correlation between the outcome HCV transgenes or antigens in mice and the immune response parameters, and further analyze and test in rhesus monkeys. Finally, we will ascertain the possible protection mechanism of the novel HCV vaccines based on analysis of immune response and infection resistance or HCV antigen cleaning outcome in mice. The study will pave a way for the development and application of HCV vaccine.

慢性丙肝病毒感染是一个危害严重的公共卫生问题，目前对HCV免疫保护机制尚不清楚。为确定疫苗有效保护的免疫应答机制，推进丙肝病毒新型疫苗的研制与应用，本项目拟在前期研究基础上，构建携带报告基因并表达HCV靶抗原的高嗜肝性重组AAV8病毒或可靶向感染肝细胞的重组慢病毒，肝内或静脉感染成年小鼠，建立可评价疫苗有效性的新型HCV转基因感染替代动物模型；应用已获得的多种HCV新型载体疫苗，经不同方案免疫上述小鼠模型或免疫后用上述病毒攻击，系统分析小鼠体内HCV转基因的转归与免疫应答参数的相关性，优化确定最佳的免疫方案，进一步在恒河猴上分析验证，以分析确定疫苗有效（免疫保护与病毒清除）的免疫应答特点及可能机制。上述结果将为丙肝疫苗的研发与临床应用提供科学思路与技术指导。

由于丙型肝炎病毒能够感染的动物很少，所以没有很好的小动物研究模型来研究新型丙型肝炎疫苗免疫保护机制，我们迫切需要建立动物模型来评价疫苗的优劣。.我们利用含HCV膜蛋白基因的慢病毒（PP)或者高噬肝性的腺相关病毒（AAV8）转导入小鼠肝脏的策略来构建小鼠模型。目前我们已经制备了两种慢病毒包装的HCV假病毒。我们还利用含HCV膜蛋白基因的质粒以高压水动力方式转导入小鼠肝脏，7-9天内可在外周血中检测到报告基因的表达。我们还建立了含HCV-H77及HCV-JFH1ORF的重组痘苗病毒及全长基因组重组痘苗病毒，建立了HCV异质性替代动物攻毒模型。.为研制新型丙型肝炎病毒疫苗，我们比较了多种靶抗原，多种疫苗形式，包括DNA疫苗，腺病毒载体疫苗，痘苗病毒载体疫苗，在小鼠体内单独及联合免疫后的免疫效果，发现联合免疫的免疫效果优于由于各单组份疫苗诱导的免疫应答效果，DNA疫苗初免腺病毒载体疫苗加强还可抵御异质性HCV病毒的攻击。.另外，我们从HCV感染血清中筛选克隆出1b和3b亚型的包膜蛋白编码基因，制备出了高滴度的1b和3b假病毒，可用于HCV中和抗体的检测。我们构建嵌合中国HCV结构基因的感染性克隆及其性状分析，可用于药物筛选及中和抗体的评价。利用感染性克隆建立的细胞模型，筛选到了两条抑制HCV感染的多肽。.我们以HBV的亚单位疫苗和病毒载体疫苗初步评价了联合免疫的策略，HBV的亚单位疫苗初免，痘苗病毒加强可获得强大持久的体液和细胞免疫应答。我们继而用重组HCV多抗原的非复制型痘苗病毒初免腺病毒加强策略免疫恒河猴，也诱导强出大的免疫应答。.本项目对于后续建立恒河猴动物模型及丙型肝炎疫苗评价与临床应用提供了理论依据。.标注本项目号发表文章11篇，其中SCI文章3篇；发表国际会议两篇；申请专利两项。