从血管加压素对水通道蛋白2的调控通路探讨“肾主水”的分子机制

中医藏象理论认为，"肾主水"，即肾气主司和调节全身水液代谢。现代医学研究表明，水通道蛋白（AQP）及其调节机制与机体水液代谢密切相关，其中关乎肾脏尿液生成的"AVP-肾脏V2受体-cAMP- PKA-AQP2通路"对维持机体水平衡具有重要作用。因此，本项目拟在藏象理论指导下，比较研究肾阳虚大鼠"AVP-肾脏V2受体-cAMP- PKA-AQP2通路"各个环节的变化，同时采用温肾方药八味地黄丸、真武汤、萆薢分清饮"以方测证"，并观察对该通路各个环节的干预作用。该研究可初步明确该通路为"肾主水"的现代生物学基础，为阐明传统中医理论"肾主水"的科学内涵提供实验依据，同时为补肾方药治疗肾虚证及其水液代谢紊乱的作用机制研究提供参考。

中医藏象理论认为，“肾主水”，即肾气主司和调节全身水液代谢。现代医学研究表明“肾脏V2R-cAMP-PKA-AQP2”通路对维持机体水平衡具有重要作用。因此，本项目从“肾主水”、水液代谢、水通道蛋白的角度，采用温肾方药肾气丸、真武汤、萆薢分清饮“以方测证”，观察三方对“AVP-肾脏V2R-cAMP- PKA-AQP2”通路各环节的干预作用，并结合采用相关阻断剂研究三个温肾方的作用机制，为阐述 “肾主水”的科学内涵提供实验依据。. 主要研究内容：（1）采用腺嘌呤、氢化可的松、寒凉中药（石膏、知母、黄柏、龙胆草）、阿霉素合用丙硫氧嘧啶建立大鼠肾阳虚证模型，从一般症状体征、肾功能损伤程度、神经内分泌系统及水液代谢相关指标等综合评价以上4种肾阳虚模型的特点。（2）观察了三个温肾方对肾阳虚大鼠“AVP-肾脏V2R-cAMP-PKA-AQP2”通路不同环节的干预作用。（3）体外培养大鼠肾脏细胞，阻断“肾脏V2R-cAMP-PKA-AQP2”通路的不同环节，观察了肾气丸以及真武汤含药血清对以上通路中不同点的干预作用。. 研究结果显示：（1）腺嘌呤200mg/kg连续灌胃21d所制备的大鼠肾阳虚模型，AQPs表达显著下降，较适合用于水液代谢紊乱的肾阳虚模型相关研究；氢化可的松、阿霉素合用丙基硫氧嘧啶以及寒凉中药造模，均可导致明显的肾阳虚证症状，肾气丸可改善以上肾阳虚的症状。（2）腺嘌呤法造模后大鼠的肾阳虚症状体征、肾功能损伤显著加重，下丘脑CRH、血清ACTH、CORT等含量显著降低，血清中AVP、V2R、cAMP、AQP2等含量均显著降低，而三个温肾方干预后，症状体征、肾功能损伤得到显著改善，下丘脑CRH、血清ACTH、CORT等含量均显著增加，AVP、V2R、cAMP、AQP2等水平均显著提高。（3）给予不同环节阻断剂后，NRK细胞中AQP2蛋白表达显著下降，而给予肾气丸含药血清干预后，AQP2蛋白表达显著升高；肾气丸、真武汤含药血清均能显著上调NRK和NRK-52E细胞V2R、PKA、AQPs的蛋白表达。.上述研究表明“AVP-肾脏V2R-cAMP-PKA-AQP2”通路是“肾主水”的主要生物学基础之一；温肾方药肾气丸等可能通过“AVP-肾脏V2R-cAMP-PKA-AQP2”通路发挥纠正肾阳虚证水液代谢紊乱的作用。.