C-型凝集素DC-SIGN在人白血病淋巴细胞免疫耐受形成中的作用及机制分析

树突状细胞（DC）功能缺陷引起的肿瘤特异性抗原的递呈障碍是肿瘤免疫耐受形成的重要机制之一，但肿瘤细胞是如何靶向DC并改变DC正常的生理功能仍然未知。最新的研究提示，DC表面特异性C-型凝集素DC-SIGN很可能在此过程中发挥了关键作用。.本研究拟使用人恶性TB淋巴细胞系和白血病患者的血液样本为对象：①筛选高表达DC-SIGN配体的肿瘤细胞系；②鉴定恶性TB淋巴细胞表面的DC-SIGN配体，对其进行结构和功能的表征；③系统分析DC-SIGN介导的DC与恶性TB淋巴细胞的相互作用对DC正常生理功能的影响及其作用机制；④对获得的重要结论使用白血病患者的血液样本进行验证；⑤最终建立白血病患者的预后不良与DC-SIGN配体表达的相关性。本研究不仅有助于揭示白血病TB淋巴细胞免疫耐受形成的分子机制，而且还将为设计新的白血病诊断及免疫治疗方法提供有价值的实验基础。

树突细胞（DC）是连接先天性免疫和获得性免疫的关键调节者。在进行精细免疫调节的过程中，其表面大量表达的负责识别内外源碳水化合物结构的C-型凝集素受体（CLRs）发挥了重要作用。有研究表明，多种人肿瘤细胞系能够与DC表面的CLRs相互作用，但其作用机制及功能并不清楚。在本项目中，我们以2种C-型凝集素DC-SIGN和MGL为研究对象，选取了3种人白血病细胞系Jurkat、CCRF-HSB-2和CCRF-CEM进行研究。DC-SIGN研究的实验结果表明，白血病细胞表面DC-SIGN的配体为ICAM-2/3，且存在于其上的3种Lewis抗原（Lex/y/a）介导了与DC-SIGN的高结合。另外，与健康人T细胞相比，Jurkat细胞呈现出显著高的结合能力。其次，Jurkat细胞负责Lewis抗原合成的岩藻糖基转移酶4（Fut4）显著高表达，对Fut4的RNA干涉明显降低Jurkat细胞的结合能力。第三，DC-SIGN可介导DC减少IL-10分泌，增加IL-6分泌；促进CD83和CD86的表达，减弱内吞能力；促进T细胞向Th1细胞分化。综上，Jurkat细胞表面的Lewis抗原可靶向DC-SIGN促进DC功能性成熟。MGL研究的实验结果表明，白血病细胞表面特异性地高表达MGL的配体。经鉴定，含有高水平Tn抗原的CD45、CD43和MUC1为MGL的配体。其次，Jurkat细胞高表达4种负责Tn抗原形成的GalNAc糖基转移酶，同时低表达负责Tn抗原延伸的糖基转移酶及其分子伴侣。对4种GalNAc糖基转移酶的RNA干涉明显降低Jurkat细胞的结合能力。第三，MGL可介导DC增加IL-6和IL-12分泌；激活DC活化的关键信号分子。另外，单核细胞被首次发现表达MGL，其功能为促进单核细胞向成熟DC分化。综上，Jurkat细胞表面的Tn抗原可靶向MGL促进DC免疫活化。此外，MGL可通过诱导EndoG和 AIF入核促进T细胞凋亡，且与Gal-1具有协同作用。本研究不仅证明了T淋巴白血病细胞表面高表达DC-SIGN和MGL的配体，鉴定了其配体分子并阐明了其特异性糖基化修饰的分子机制，而且提供了白血病细胞以其特异性的糖配体靶向DC-SIGN和MGL促进DC免疫活化的实验证据。本研究为以DC-SIGN和MGL为靶点的T淋巴细胞白血病的DC免疫治疗提供了有价值的实验基础。