致病疫霉诱导的番茄防卫相关转录因子基因的克隆及功能分析

致病疫霉侵染番茄造成的晚疫病危害面广，常导致产量和品质的降低甚至绝收。掌握病原物和寄主互作的分子机理，培育抗病品种对病害的可持续控制具有重要的理论和实际意义。本研究在分离到致病疫霉并已确定抗感病番茄品种的基础上，拟通过构建病原菌诱导的特异表达基因的抑制差减杂交cDNA文库；对获得的ESTs序列进行生物信息学分析，探索诱导后的基因表达情况；设计引物扩增防卫相关WRKY家族转录因子基因的部分序列，进而用RACE法获得全长；克隆后，用Q-RT-PCR研究其表达特性、用凝胶阻滞实验分析体外结合特性、用酵母单杂交系统研究体内结合特性和转录激活特性、用基因枪轰击技术进行细胞定位；再以Gateway高效克隆技术构建植物超表达载体，通过农杆菌介导的叶盘法转化番茄，对转基因植株做抗性鉴定，综合分析转录因子基因的作用；选出抗病植株。为揭示番茄抗晚疫病反应机制，开辟抗病育种新途径奠定理论和材料基础。

晚疫病是番茄生产的大敌，它不仅发生面广，影响植株的长势和产量，严重时还会造成绝收。挖掘抗病相关基因、掌握其功能并在育种中加以应用对农业生产至关重要。本项目从番茄中分别克隆到6个WRKY和2个MYB转录因子基因；对它们的结构域、进化关系以及各种特性进行了详尽的分析；构建了表达载体，通过融合质粒导入农杆菌，叶盘法转化；对超表达各基因的植株在组织培养和盆栽条件下的生理、生化特性以及抗性进行了检测鉴定和分析，确定了基因的功能；创制出一批新的资源材料。为番茄抗病分子育种奠定了理论和材料基础。截至目前，本项目已发表论文6篇，其中2篇被SCI收录；毕业研究生2名。