基于肝非实质细胞的藏药波棱瓜子靶向修复肝损伤作用和机制研究

Based on the previous study,we first discovery the lignans of Herpetospermum caudigerum has obvious anti liver injury and viral in animal body, which protect liver cells through inhibiting the NF-κβactivity,reducing oxidative stress, decreasing the expression of inflammatory factor. On this basis,relying on the liposome （biofilm components） modification technology to assist the delivery and intake of the drug,and through liver injury experiment of the whole animal(chemical, alcohol, immunological and surgical), we study the different effect on liver injury among the lignans and its three activity ingredients（ herpetin，herpetrioneHerpetospermum fluorenone）,discuss their effect on the proliferation and differentiation of liver non parenchymal cells for reversing liver injury , and the synergy combined with bone marrow stem cell transplantation, track the effective constituents of Tibetan medicine (Group) how to play the role of repair ofinjury of hepatocytes, look for drugs of the liver cell regeneration, and provide scientific basis for Herpetospermum caudigerum developed into a new drug for the treatment of liver injury with independent intellectual property rights, whith will also be the exploration of small molecular effective components of traditional Chinese medicine and ethnic medicine for stem cell induced proliferation and differentiation and homing in the blank field.

本项目前期研究在国际上首次发现藏药波棱瓜子所含总木脂素在动物体内具有明显抗肝损伤及病毒双重作用；通过抑制NF-κB活性，减少氧化应激，减少炎症因子表达，从而达到保护肝细胞的作用，同时显示出具有明显肝细胞修复作用。在此基础上，本项目拟借助脂质体（生物膜成分）修饰技术，协助药物的递送和摄入，通过整体动物（化学、免疫、酒精和外科）肝损伤模型，研究波棱瓜子总木脂素和三个有效成分（波棱素、波棱酮、波棱芴酮）抗肝损伤作用；从影响肝非实质细胞增殖分化角度探讨其肝修复作用；以及与骨髓干细胞移植联合用药的增效作用。追踪藏药对肝细胞损伤修复的有效成分（群），这将是中药/民族药小分子有效成分对干细胞诱导增殖分化和归巢作用这一空白领域的探索性研究。

本项目通过制备波棱瓜子有效成分脂质体，提高了药物的肝靶向性和保肝药效；观察了波棱瓜子总木脂素及成分对酒精与肝切除诱导的肝损伤保护作用及机制，进一步明确了波棱瓜子总木脂素及波棱素抗肝纤维化的体内外药效作用，并针对肝星状细胞等非实质细胞环节开展作用机制研究。此外，该项目还进一步展开对波棱瓜DNA条形码的筛选鉴定进行了探索性研究。主要结果如下：.（1）以半乳糖基修饰的脂质为肝靶向材料，所制备的波棱芴酮脂质体无体内溶血现象，且对CCl4诱导的小鼠肝损伤具有保护作用，其作用机制可能与降低脂质过氧化，抑制炎症反应以及抑制肝细胞凋亡有关。.（2）波棱瓜子总木脂素对急慢性酒精性肝损伤均有一定保护作用，可降低小鼠肝脏ADH活性和 CYP2E1表达量，升高ALDH2活性，并可抑制CTGF和TGF-β分泌及其信号通路中p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达，表明其保护作用机制可能与调节乙醇脱氢酶，肝微粒体酶及抗肝纤维化作用等方面有关。波棱瓜子总木脂素可改善肝切除小鼠的炎症因子释放、恢复肝组织病理形态、促进肝脏再生，其机制可能与抑制IL-6/STAT-3等信号通路有关。.（3）波棱瓜子总木脂素可改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化，减少纤维结缔组织增生，降低HA、HYP、TGF-β1含量。体外实验研究表明，总木脂素可诱导肝星状细胞的凋亡，抑制枯否细胞分泌TGF-β1和TNF-α。波棱素通过上调肝星状细胞MMP-13基因的表达、下调TIMP-1、α-SMA、TGF-β1和 COL I基因的表达，抑制细胞外基质的合成发挥抗肝纤维化作用。.（4）DNA条形码候选序列对藏药波棱瓜属植物的鉴定作用研究结果显示，ITS2序列在所研究的波棱瓜属药用植物中的扩增效率和测序成功率均为100%，其种内种间变异、Barcoding gap与其他 DNA条形码候选序列相比具有明显的优势，表明以ITS2序列作为DNA条形码，可对波棱瓜进行准确、快速识别和鉴定。