香樟冷诱导转录因子CBF1基因克隆及转化香樟抗冻育种价值的评价

本研究将在优化香樟胚性愈伤组织植株再生体系以及根癌农杆菌介导遗传转化体系基础上，利用同源克隆的方法，拟从香樟中克隆出冷诱导途径中编码CBF1转录因子基因。将香樟CBF1与拟南芥的CBF1基因作为目的基因分别导入到香樟植株中，用以研究香樟CBF1基因同源表达和拟南芥CBF1基因异源表达对香樟植株抗冻性的影响。启动子选择CaMV35s组成性启动子和冷诱导RD29A(COR78)启动子进行比较研究，用以鉴定两种启动子驱动香樟CBF1基因和拟南CBF1基因转化香樟植株的低温抗性和生长状况的差别。在低温胁迫下对转CBF1基因香樟植株进行抗冻性的研究，最终评估通过转CBF1基因进行香樟抗冻育种的价值。本研究将为培育抗冻香樟新种质、加快香樟优良品质遗传改造进程、为我国园林树种的抗冻育种提供新的思路和材料并为其他品质的改良提供一定的理论依据。

本研究首次成功地建立香樟胚培苗茎切段高频植株再生体系和遗传转化体系；并以此为基础进行抗寒基因的转化；从香樟中克隆并鉴定了4个香樟CBF-like基因，并将CcCBFb, CcCBFc和CcCBFd构建到启动子35S控制的植物表达载体pCAMBIA2300上；从香樟中克隆得到4个Actin和1个EF1a内参基因片段，设计相应q-PCR引物，并对香樟CcCBFa和CcCBFb进行表达模式研究；结合转基因烟草的抗寒性生理分析，初步认定香樟CcCBFb基因对增强植物的抗寒性具有一定作用。农杆菌介导的拟南芥AtCBF1基因和香樟CcCBFb基因转化香樟的研究正在进行中，以期获得抗寒性改良的转基因香樟新种质。本研究将为加快香樟优良品质遗传改造进程、为我国园林树种的抗寒育种提供新的思路和材料，并为其他品质的改良提供一定的理论依据。