基于肾脏DCT1部位探讨cyp2c44基因在小鼠盐敏感性高血压发生中的作用及其作用机制

Despite we all know that lack of a cyp2c44 gene causes dietary salt-sensitive hypertension, the molecular basis of hypertension remain uncertain. The sodium chloride cotransporter (NCC) mediates sodium chloride reabsorption in the early distal convoluted tubule (DCT1). Stimulation of NCC and NaCl reabsorption resulted in the raising of blood pressure. Our previous study strongly suggests that the Kir4.1/5.1 K channel is related to DCT function, including the activity of NCC. Thus, we speculate that Kir4.1/5.1 K channel and NCC activity involve in the salt-sensitive hypertension which caused by lack of a CYP2C44 epoxygenase. We will perform experiments in wild type (WT) and cyp2c44 gene knockout (KO) mice to study whether the disruption of cyp2c44 gene increases the activity of kir4.1/5.1 k chanel and NCC on high salt diet. In addition, we will also examine the NaCl reabsorption, blood pressure and EAK/p38 pathway to investigate the dominant role of cyp2c44 gene in regulation of blood pressure.

敲除cyp2c44基因可导致盐敏感性高血压，但具体机制并不清楚。钠-氯同向转运体（sodium chloride cotransporter,NCC）是介导肾脏远端小管前段（early distal convoluted tubule, DCT1）NaCl运输的关键转运体。根据我们的前期研究，DCT1管周膜Kir4.1/5.1钾通道活性直接影响NCC功能。本课题推测由cyp2c44基因缺失而引起的盐敏感性高血压与肾脏DCT1管周膜Kir4.1/5.1钾通道、NCC活性改变有关。我们将利用野生型C57BL/6J及cyp2c44基因敲除小鼠研究高盐饮食是否是通过增加敲除小鼠肾脏Kir5.1/5.1钾通道及NCC活性而引起血压的升高。同时，我们还将观察NaCl重吸收、血压变化以及ERK/p38信号转导途径的作用以探究cyp2c44基因在盐敏性高血压发生中的作用及其作用机制。

细胞色素P-450（Cyp）环氧酶依赖的花生四烯酸（AA）代谢物已被证明可以抑制肾Na转运，而抑制Cyp-环氧酶与盐敏感性高血压有关。我们使用膜片钳技术检测cyp环氧合酶依赖的AA代谢物是否抑制了远端曲小管（DCT）基底外侧40-pS K通道（Kir4.1/Kir5.1）。应用AA抑制了DCT中的基底外侧40-pS K通道。AA对40-pS K通道的抑制作用是特异性的，因为亚油酸和油酸都不能模拟AA对K通道的抑制作用。N-甲基磺酰12、12-二溴二溴11烯酰胺抑制环单加氧酶或抑制环加氧酶均不能消除AA对40-pS K通道的抑制作用。然而，N-甲基磺酰-6-（丙氧基苯）己酰胺对环氧酶的抑制消除了AA对DCT中40-pS K通道的影响。此外，添加11,12-环氧二十碳三烯酸（EET）或14,15-EET也抑制了DCT中的40-pS K通道。全细胞记录显示，在DCT中，AA抑制减少，而N-甲基磺酰-6-（丙氧基苯）己酰胺增加Ba敏感的K电流加。最后，14,15-EET在Cyp2c44敲除小鼠DCT中能够抑制基底外侧40-pS K通道。我们得出结论，cyp-环氧酶依赖的AA代谢物抑制DCT的基底外侧Kir4.1/Kir5.1，cyp2c44-环氧酶在小鼠DCT的基底外侧K通道的调控中发挥作用。