肿瘤微环境IL-6通路激活在NK/T细胞淋巴瘤增殖、凋亡及化疗耐药中的作用

Patients with high risk natural/killer T-cell lymphoma (NK/TCL) are associated with fever, perforation, rapid tumor progression, and chemo-resistance. The long-term survial is poor (around 10%). According to prior studies, the inflammatory factors were associated with poor prognosis, while the exact mechanism is still unclear. In a recent study, we examined the serum inflammatory cytokine spectrum in 60 patients with NK/TCL, using a 25-plex cytokine kit. Our findings revealed that some elevated serum cytokines correlated with inflammatory symptoms and poor prognosis, especially the interleukin-6 (IL-6). We have found the activation of STAT3 pathway and high secretion of IL-6 both in tumor cells and macrophages in the microenvironment of NK/TCL. It was suspected that in most elevated serum cytokines, the IL-6 was the key one in promoting tumor progression and chemo-resistance. On the basis of our previous study, we are planning to investigate the potential role of the IL-6 in promoting tumor progression and chemo-resistance, and the activation of STAT3 pathway by IL-6, using the cell co-culturing system and the lymphoma-beared nude mice model. Moreover, the efficacy of blocking IL-6/STAT3 pathway in the management of high risk NK/TCL will by analyzed, which may provide potential novel targets and directions in the treatment of this kind of lymphoma with poor prognosis.

高危NK/T细胞淋巴瘤（NKTCL）临床表现为发热、坏死穿孔、肿瘤快速进展和化疗耐药，长期生存约10%。文献报道炎症因素与预后差相关，但缺乏系统性、深入的研究。我们检测了60多例NK/TCL病例血清25种炎症因子，发现多个炎症因子的增高与预后相关，其中IL-6与炎症表现、预后差的关系尤为密切。我们对NKTCL肿瘤微环境的进一步研究发现：高危NKTCL病例的肿瘤细胞及巨噬细胞存在IL-6高表达、微环境STAT3通路激活。由此我们推测，IL-6可能是促进高危NKTCL疾病进展、化疗耐药的关键。本课题利用NK/T细胞株、NK/T细胞-单核细胞共培养系统、荷瘤裸鼠模型，研究IL-6对NKTCL细胞增殖、抗凋亡、耐药的影响，以及抑制IL-6及其下游通路对肿瘤细胞凋亡及耐药的影响，国内外未见同类报道。多种针对IL-6通路的药物现已应用于临床，我们开拓性的研究有望为高危NK/TCL寻找到新的靶点。

研究背景：NK／T 细胞淋巴瘤（NK／T-cell lymphoma，NKTCL）属结外非霍奇金氏淋巴瘤，是EB病毒（EBV）相关淋巴瘤, 预后不佳。与炎症密切相关，但炎症因素促进肿瘤发展的机制缺乏深入的研究。.主要研究内容：本研究拟利用NK/T细胞株、NKTCL细胞-单核细胞共培养系统、以及荷瘤NOD/SCID小鼠模型，研究微环境IL-6通路激活是否为促进NK/T淋巴瘤进展的机制，并探讨抗IL-6治疗高危NKTCL的有效性。.重要结果及意义：.（一）IL-6对NKTCL细胞增殖、凋亡的影响。.不同浓度IL-6作用促进NKTCL细胞增殖。IL-6R抗体使NK-YS细胞株中IL-6R抗体组细胞增殖活性低（P<0.05）。加入IL-6后，NKTCL细胞株细胞凋亡比例下降（P>0.05），而IL-6中和抗体组、IL-6R抗体组凋亡比例升高（P<0.05）。NKTCL细胞株IL-6通路下游蛋白表达情况：p-STAT3、BCL-2、BCL-XL、MCL-1、Survivin等蛋白在NK-YS、SNK-6、SNT-8细胞株的各组中均有持续表达；加用IL-6处理后，NK-YS、SNK-6、SNT-8细胞株的p-STAT3、BCL-2、BCL-XL、MCL-1、Survivin、等蛋白表达上调，p-ERK、p-AKT等蛋白表达无变化。.（二）微环境巨噬细胞IL-6旁分泌对NKTCL细胞增殖、凋亡的影响：分组建立单核-NKTCL细胞共培养系统，检测其中肿瘤细胞活性。结果提示：M0组的THP-1细胞悬浮生长，细胞饱满透亮，与M1组的M1巨噬细胞明显不同（贴壁生长，伪足伸出），而M2组的巨噬细胞基本与M0组形态类似。肿瘤细胞活性：M1组淋巴瘤细胞活性受明显抑制，M2组增殖活性明显升高。.（三）NKTCL患者血浆EBV-DNA水平和CD4+CD25+T细胞的检测：我们分析了18例患者治疗后EBV-DNA的变化，并采用流式细胞仪检测这些细胞的表型特征。结果显示化疗后EBV-DNA阳性患者与化疗后EBV-DNA阴性患者相比，CD4+CD25+T细胞的比例高（36.2% vs.21.1%，P=0.006），这提示EBV-DNA阳性患者比EBV DNA阴性患者免疫抑制作用更强。