原发性胆汁性肝硬化中B1细胞免疫学特性的研究

Primary biliary cirrhosis (PBC) is a chronic inflammatory cholangitis, characterized by antimitochondrial antibody (AMA) positive and higher serum immunoglobulin M levels. Our previous data showed that there were a large number of IgM positive B cells and dendritic cells (DC) infiltrated in portal tracts in PBC patients. Recently, the new identified B cell subset-B1 cells become a research hotspot, the cells secrete IgM, activate T cells, play an important role in autoimmune diseases. We hypothesize that dendritic cells present PDC-E2 antigen epitopes to B cells, activate B1 cells which secrete IgM and AMA, also induce T cells stimulation, and are involved in immune-mediated bile duct injury. Our study intends to answer the following scientific questions : 1. Dose B1 cells have significant changes in PBC? Is there a correlation between B1 cell number and intrahepatic inflammation or fibrosis？2. Wether PDC - E2 antigen could stimulate B1 cells proliferation, then produce high levels of IgM and AMA, and activate T cells. 3.Whether bile duct injury will be aggravating with B1 cell reinfusion in PBC mice. Our results will be helpful in illustrating the pathogenesis of PBC and finding the potential treatment targets.

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是以肝内胆管细胞损伤为主的自身免疫性肝病，患者血清存在高滴度抗线粒体抗体（AMA），IgM水平显著增高。我们前期实验发现PBC肝内存在大量IgM阳性B细胞，且胆管周围分布许多树突状细胞。最新鉴定的B细胞亚群-B1细胞可分泌IgM、刺激T细胞活化，在自身免疫反应中发挥重要作用。我们假设：树突状细胞将胆管上皮细胞丙酮酸脱氢酶复合体-E2（PDC-E2）抗原递呈至B细胞，B1细胞活化，产生高水平IgM和AMA，活化T细胞，参与胆管细胞免疫攻击。拟回答以下科学问题1.PBC体内B1细胞有无明显变化？B1细胞数量与肝内炎症、纤维化是否存在相关性？2.B1细胞是否存在 PDC-E2抗原特异性受体？PDC-E2抗原能否刺激B1细胞增殖，产生高水平IgM和AMA，活化T细胞。3.观察PBC小鼠体内回输B1细胞是否对胆管损伤有影响？本研究有利于阐明PBC免疫机制，提供潜在干预靶点

人类B1细胞可以CD11b为标志再区分为两个亚群，其中CD11b+ B1细胞约占全部B1细胞的10%，大量表达CD86，可刺激CD4+T细胞活化扩增；而CD11b-B1细胞占B1细胞的绝大多数，可以自发合成分泌天然免疫球蛋白。因为B1细胞的这两种功能，研究者推测其可能参与了自身免疫病的发病机制，但目前尚缺乏B1细胞在原发性胆汁性胆管炎（原发性胆汁性肝硬化，现已更名为原发性胆汁性胆管炎）的相关研究。我们采用流式细胞术检测AIH、PBC患者和健康对照者外周血中B1及其他B细胞亚群的比例变化。结果显示AIH和PBC患者外周血B细胞中B1细胞的比例较健康对照明显增加。AIH和PBC患者B1细胞中CD11b+亚群的比例较健康对照明显增加。活动期AIH患者的CD11b+亚群比率较缓解期的患者明显增加。流式细胞术分选出CD20+CD27+CD43+B1细胞体外培养，并用丙酮酸脱氢酶复合体-E2（PDC-E2）抗原刺激B1细胞，ELISA技术检测IgM分泌水平变化。结果显示与健康对照相比，AIH患者、PBC患者外周血CD20+CD27+CD43+B1细胞IgM分泌水平明显升高，体外培养后PDC-E2抗原刺激，PBC外周血B1细胞IgM分泌水平明显升高，与正常人及AIH患者比较有统计学意义。初步结果显示B1细胞可能在原发性胆汁性胆管炎发病中发挥重要作用，后续相关实验正在进行中。.此外，我们课题组在本项目实施过程中还研究髓系抑制细胞（MDSCs）在原发性胆汁性胆管炎发病过程中发挥的作用及机制。结果提示PBC患者外周血和肝内均出现单核型MDSCs的明显积聚，且MDSCs具有强大的免疫抑制功能。在PBC患者肝内，受伤的小胆管可高表达CCN1，CCN1通过与MDSCs表面的整合素受体integrinαMβ2结合，促进STAT3的磷酸化，从而促进MDSCs扩增。同时CCN1还可诱导MDSCs高表达iNOS, 抑制T细胞的增殖。功能性MDSCs是维持PBC患者肝内免疫稳态的重要负发挥机制，可抑制过度活化的T细胞介导炎症反应。CCN1对功能性MDSCs的调控作用具有潜在的免疫治疗价值。