加减驻景方通过调控AKT/HIF-1α/VEGF信号通路多靶点干预CNV形成的机制

Choroidal neovascularization (CNV) is the core of pathological characteristics of high myopic maculopathy, age-related macular degeneration and other eye diseases, which can cause the loss of central vision seriously and blindness. It is a hotspot and difficult problem to study the formation mechanism of CNV and the effective measures of prevention and cure. Our previous clinical research has suggested that Jia Jian Zhu Jing Fang can obviously promote the eyes hemorrhage absorption, improve eyesight, and animal experiments show that it reduced the area and formation of CNV through decreasing the expression of VEGF. In recent years, it has also indicated that hypoxia inducing factor-1α signaling is one of the significant signals regulating vascular endothelium growth factor (VEGF) expression. Therefore, this study tends to take the human pigment epithelial cells and brown norway (BN) rat induced by laser CNV model as research object, and molecular biology, cell biology, cell transfection technique, tissue pathology as methods, in order to discuss the role of Zhu Jing Fang in AKT/HIF-1α/VEGF signaling pathways, and the mechanism in inhibiting CNV, which intends to provide scientific evidence for the clinical application of traditional Chinese medicine (TCM) and explore new treatments.

脉络膜新生血管（CNV）形成是高度近视黄斑病变、年龄相关性黄斑变性等眼病的核心病理特征，可造成患者中心视力严重下降而致盲，研究CNV形成机制和有效防治措施是目前研究的热点和难点。加减驻景方经临床研究证实可明显促进眼底出血吸收，提高视力，动物实验证实减少CNV面积，降低VEGF表达而抑制CNV生长。近年来研究发现在CNV形成过程中，AKT/HIF-1α/VEGF信号通路起着重要的调控作用，因此，本研究拟以建立化学性缺氧的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）模型、常氧状态下应用转染技术构建AKT转染激活与AKT转染失活的ARPE-19细胞株和BN大鼠激光诱导的CNV模型为研究对象，以分子生物学、细胞生物学、组织病理学等为研究手段，深入探讨加减驻景方在AKT/HIF-1α/VEGF信号通路中的作用环节和靶点，揭示其抑制CNV的作用机制，为该中药临床应用提供科学依据，进而探索新的治疗策略

脉络膜新生血管（CNV）是年龄相关性黄斑变性、病理性近视、中心性渗出性脉络膜视网膜病变等疾病的共同病理环节，易造成中心视力严重下降甚至致盲，是眼科领域研究的热点和难点。本课题组前期研究表明，加减驻景方可明显促进CNV患者眼底出血吸收，提高视力；可减少动物模型CNV面积，其作用机制与降低VEGF表达有关。基于此，本项目分别建立激光诱导的BN大鼠CNV模型、化学性缺氧的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）模型、常氧状态下AKT转染激活的ARPE-19细胞模型和化学性缺氧的大鼠脉络膜血管内皮细胞模型（RCVECs），采用分子生物学、细胞生物学及组织病理学等方法，观察加减驻景方对CNV大鼠脉络膜荧光渗漏强度、CNV厚度、AKT/mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路与TLR-4/ NF-κB/IL-6信号通路相关因子活性的影响，并在此基础上深入探讨中药单体人参皂苷Rg3和丹参酮IIA干预实验性CNV的作用及其机制；同时观察加减驻景方含药血清对ARPE-19缺氧模型，AKT转染ARPE-19细胞模型和RCVECs缺氧模型中细胞表达HIF-1α/VEGF蛋白的影响。结果显示：1. 加减驻景方能够抑制BN大鼠CNV的形成，减少CNV渗漏，其机制可能与抑制缺氧信号通路、炎症信号通路的活性以及二者之间的交叉调控途径有关。2.人参皂苷Rg3可抑制BN大鼠CNV的形成，其机制抑制NF-κB和HIF-1α信号通路的激活，下调TNF-α、NF-κB和HIF-1α、VEGF蛋白的表达有关。3. 丹参酮IIA可能通过HIF-1α/VEGF信号通路抑制BN大鼠CNV的形成。4. 加减驻景方含药血清可抑制Akt基因转染后ARPE-19细胞VEGF的表达。5. 加减驻景方含药血清可抑制ARPE-19细胞缺氧模型、RCVECs缺氧模型中VEGF、HIF-1α因子的表达。本研究为临床应用加减驻景方治疗CNV提供了实验依据，丰富了“瞳神络病”病因病机和治则治法的科学内涵，同时为中药单体治疗CNV奠定了基础。