特异性靶向人HBV基因的人工转录因子的构建

肝细胞核内的HBV cccDNA是HBV持续感染的关键因素，但目前国内外均无有效手段将其和整合到肝细胞基因组内的HBV DNA完全清除。研究证实，体外构建的人工转录因子（ATF）可以识别病毒DNA上的特异性核酸位点，抑制病毒基因的转录复制；我们前期研究工作已确定了HBV基因组中ATF作用的最佳靶点。本项目拟在前期工作的基础上进行以下研究：1.设计并构建特异性靶向HBV的新型ATF；2.构建携带ATF病毒载体，并检测其蛋白表达情况和结合动力学效应；3.在细胞水平和动物模型上验证ATF抑制HBV转录复制效果。通过上述研究：期望构建的ATF能清除肝细胞核内的HBV cccDNA和整合到肝细胞基因组内的HBV DNA，从而遏制HBV在体内的持续感染，为探索防治HBV感染的新方法提供实验依据。

肝细胞核内的 HBV cccDNA 是HBV 持续感染的关键因素，但目前国内外均无有效手段将其和整合到肝细胞基因组内的HBV DNA 完全清除；研究证实，体外构建的人工转录因子（ATF）可以识别病毒DNA上的特异性核酸位点，抑制病毒基因的转录复制。我们通过前期研究工作确定了HBV基因组中ATF作用的最佳靶点，进而在此基础上设计并构建了特异性靶向HBV的新型ATF；构建了携带ATF病毒载体，并检测了其蛋白表达情况和结合动力学效应；在细胞水平和动物模型上验证了ATF抑制HBV转录复制效果。最终通过上述手段，我们完成了ATF的构建和表达情况的研究；构建了ATF原核、真核表达质粒，以及其抑制HBV复制的生物学活性分析，明确了ATF对于肝细胞核内的HBV cccDNA、整合到肝细胞基因组内的HBV DNA以及HBV在体内的持续感染的抑制作用。为探索防治HBV感染的新方法提供了实验依据及临床思路，其研究内容及学术思路在国内外未见报道，具有明显创新性、科学性和先进性。