补虚化瘀中药调控microRNA促进糖尿病性溃疡创面愈合的机制研究

Angiogenesis, granulation tissue formation and re-epithelialization disorders ,being the major cause of difficult diabetic ulcer wound healing, is influenced by the microRNA regulation.Based on the the effect of Buxu Huayu herbs regulation the expression of HIF-1α, VEGF, TGF-β1 and promotion of diabetic ulcer wound healing,and around the important pathological mechanism "angiogenesis, granulation tissue formation, re-epithelialization l-miRNA-wound repair" ,applying techniques and methods of epigenetics, cell and molecular biology, biochemistry,we establish STZ induced diabetic ulcer rats model,with key indexes (miRNA-210、miRNA-21、CyclinA、HIF-1α、TGF-β1、E2F3、TIMP3、VEGF、MVD)detection,to reveal the effect of traditional Chinese medicine on Angiogenesis, granulation tissue formation and re-epithelialization and microRNA regulation during diabetic wound healing,the machnism of Buxu Huayu herbs on promotion diabetic wound healing,and the different characteristics and the interaction of internal and external therapies,to provide the foundation for the theory of “Jiping Pizhang”, and the new ideas for diabetic ulcer wound healing.

血管新生、肉芽形成及再上皮化障碍是糖尿病性溃疡创面难愈合的重要原因，受microRNA（miRNA）调控。前期研究发现补虚化瘀中药能通过调控HIF-1α、VEGF、TGF-β1等表达水平而促进糖尿病性溃疡创面愈合，围绕“血管新生、肉芽形成、上皮化—microRNA—创面修复”重要病理机制，运用表观遗传学、细胞与分子生物学、生物化学等技术和方法，通过糖尿病性溃疡创面关键指标（miRNA-210、miRNA-21、CyclinA、HIF-1α、TGF-β1、E2F3、TIMP3、VEGF、MVD等）检测，揭示不同用药途径的补虚化瘀中药调控miRNA表达水平，诱导血管新生、促进肉芽形成及上皮化，加速创面愈合机制，及内治法与外治法的不同特点及交互作用，为“肌平皮长”理论奠定基础，提供糖尿病慢性创面愈合新思路。

目的：观察补虚化瘀中药对糖尿病溃疡差异表达microRNAs影响以及对miRNA-21-5p/TIMP-3/TGF-β轴、HIF-1α/miR-210-3p/E2F3轴的调节作用。.方法：使用基因芯片检测筛选第7天创面组织差异表达microRNAs；使用qPCR和Western bloting检测组织TIMP-3、TGF-β、HIF-1α、VEGF、E2F3表达。.结果：1.对糖尿病溃疡大鼠促愈作用：与模型组相比，各干预组在用药后第3、7、14、21天的愈合率均升高（P＜0.05），愈合时间缩短（P＜0.05）。其中，内外合治组的愈合率在用药第7天时高于内治和外治组，在用药第14天时高于内治组（P＜0.05）。2.对糖尿病溃疡创面中microRNAs影响：基因芯片筛选出185个差异基因。其中，内治组调节了128个，外治组共调节了175个，两者协同调节了126个差异基因。.3.对miRNA-21-5p/TIMP-3/TGF-β 轴调节作用：对比模型组，各干预组miRNA21-5p水平增高（P＜0.01），TIMP-3表达降低（P＜0.01），TGF-β表达增高（P＜0.01）；各干预组之间比较：在用药第7天，内外合治组促进miRNA21-5p、TGF-β 表达，抑制TIMP-3表达的作用强于内治组（P＜0.05）。.4.对HIF-1α/miRNA-210-3p/VEGF轴调节作用：对比模型组，各干预组miR-210-3p水平减少（P＜0.01），E2F3、HIF-1α、VEGF表达增多（P＜0.01）；各干预组之间比较：在用药第7天，内外合治组促进E2F3表达作用强于内治和外治组（P＜0.05）。.结论：1.补虚化瘀中药能够有效促进糖尿病大鼠创面愈合，在促进创面愈合率方面，补虚化瘀中药内外联用优于单独用药。2.补虚化瘀中药能协同调节糖尿病溃疡大鼠创面中126个差异miRNAs。3.补虚化瘀中药能够通过影响miRNA-21-5p/TIMP-3/TGF-β1轴、HIF-1α/miR-210-3p/E2F3轴来促进创面愈合；在给药第7天时，补虚化瘀中药联用对miRNA-21-5p/TIMP-3/TGF-β1轴的调节作用优于单独内治。