ITF通过"自身诱导"促进受损肠黏膜修复的机制研究

肠三叶因子（ITF）是一种具有药理作用的小分子多肽，对于受损肠黏膜具有良好的修复作用，然而其作用机制尚不清楚。前期工作证明，肠黏膜损伤后ITF不但具有修复作用，还具有自身诱导增加表达的现象。结合已获得的结果并复习文献，申请者提出"肠黏膜损伤后，游离的ITF激活自身启动子中ITF反应元件，以自身诱导的方式上调ITF的表达，促进受损肠黏膜修复"的假说。本项目拟进行：1.验证自身诱导现象，构建启动子缺失突变载体寻找ITF反应元件；2.通过EMSA、CHIP实验，从体外、体内确定转录因子；3.构建转录因子干扰及过表达腺病毒载体，验证转录因子对ITF的影响。本研究以肠黏膜损伤后ITF的基因调控为切入点力图验证上述假说，探讨ITF促进受损肠黏膜修复的作用机制，为阐明ITF药理作用的分子机制奠定基础。

肠道被认为是创伤应激的中心器官之一，因此促进受损黏膜的修复是亟须解决的问题，也是目前基础研究和临床治疗的热点之一。肠三叶因子（ITF）是一种具有药理作用的小分子多肽，对于受损肠黏膜具有良好的修复作用，然而其作用机制尚不清楚。本项目以肠黏膜损伤后ITF的基因调控为切入点，力争找到ITF反应元件及相关转录因子，为解释ITF促进受损肠黏膜修复提供理论依据。在本研究中，我们首先进行了ITF启动子生物信息学分析，预测ITF全长启动子及相关调控转录因子；然后构建ITF启动子区域表达载体，通过截短突变寻找维持ITF基础转录活性的转录因子；利用定点突变的方法确定ITF诱导自身转录的转录因子；最后通过CHIP实验确定转录因子的存在，并构建转录因子干扰及过表达载体，验证转录因子对ITF的影响。通过研究发现，在-1826bp~+19bp的ITF启动子序列中， -301bp~-293bp的Sp1结合位点（CTAGGAGGGC）为维持ITF基础转录的关键转录因子；在-1417~-1407 bp发现了正反两处STATx的结合位点（TTCCTGGAA）为维持自身诱导活性的反应元件； CHIP实验以及干扰、过表达实验均证实转录因子的存在及作用。本研究结果证实了“肠黏膜损伤后，游离的ITF激活自身启动子中ITF反应元件，以自身诱导的方式上调ITF的表达，促进受损肠黏膜修复”的假说。为解释ITF促进受损肠黏膜修复的作用机制，阐明ITF药理作用的分子机制奠定基础。