Hippo-YAP通路在原发性肝癌化疗耐药中的作用及机制研究

Primary liver cancer is one of the most common malignant tumors of the digestive system. Because it's characterized with notoriously high chemoresistance, fast progression and high recurrence rate, the effective systemic therapy strategy is still limited. Recent studies show that Hippo-YAP pathway plays an important role in cancer development and progression, YAP protein is expressed at higher levels in the tissue of human malignant tumors such as colon cancer, stomach cancer, non-small cell lung cancer and ovarian cancer, etc. Significant inverse correlation was proved between its expression and the prognosis. However, studies on the role of Hippo-YAP pathway in primary liver cancer are limited, especially in the chemotherapy resistance of liver cancer is still unknown. In our previous study, it shows that the expression of YAP is highly expressed in the tissue of cholangiocellular carcinoma, as compared with the matched adjacent nonmalignant tissue; the expression of YAP is upregulated during the treatment of drugs in the cells of liver cancer. Therefore, we suppose that Hippo-YAP pathway may play an important role in the prevention and therapy of primary liver cancer, especially in the regulation of chemoresistance. This study is designed to test such hypothesis.

原发性肝癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，由于其具有化疗高度耐药、进展迅速以及复发率高等特点，因此至今仍缺乏有效的系统治疗方案。新近的研究发现Hippo-YAP通路在恶性肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用，YAP蛋白在人结肠癌、胃癌、非小细胞肺癌以及卵巢癌等恶性肿瘤中高表达，并与临床预后成显著负相关，然而关于Hippo-YAP通路在原发性肝癌方面的研究则十分有限，特别是Hippo-YAP通路是否在肝癌化疗耐药方面发挥作用尚属未知。本课题在前期研究中发现YAP 在胆管细胞型肝癌组织中呈高表达，而在癌旁组织中低表达；肝癌细胞经化疗药物干预，YAP表达明显上调。因此，我们推测Hippo-YAP通路在原发性肝癌的防治，尤其是化疗耐药调控方面可能发挥着重要的作用。本项目将进一步明确Hippo-YAP通路在原发性肝癌发生发展以及化疗耐药方面的调控作用，有望为肝癌的系统治疗提供新的治疗靶点和干预手段。

项目背景：.胆管癌是一种起源于肝内或者肝外胆道系统的高度恶性的肿瘤，由于其恶性程度极高，所以患者的预后和五年生存都非常低。而且近年来发病率和致死率呈逐年上升的趋势。因此，研究胆管癌发生发展的分子生物学机制对于开发新的治疗手段和分子标志物迫在眉睫。Hippo通路下游起主要效应的YAP蛋白是一种转录共激活子，可以与TEAD家族、SMAD家族等转录因子家族成员结合，共同调控靶基因的转录。YAP蛋白的表达升高可见于多种肿瘤，例如肝癌、髓母细胞瘤、结肠癌、口腔鳞状细胞癌、卵巢癌、膀胱癌、非小细胞肺癌等。时至今日，YAP蛋白在胆管癌中所起到的作用尚不明确，因此，本文主要探索YAP蛋白在胆管癌进展中的作用。.主要研究内容：.检测YAP在胆管癌患者肿瘤组织中的表达情况，并结合肝癌患者的临床病理学资料分析YAP表达与胆管癌患者预后的关系；应用划痕实验、迁移和侵袭实验以及裸鼠腹腔转移模型来验证YAP对胆管癌侵袭转移方面的影响；应用体外迁移和侵袭实验以及体内裸鼠移植瘤和腹腔转移模型来验证gankyrin对YAP诱导的胆管癌增殖和侵袭转移的影响，同时应用应用免疫荧光、蛋白免疫印迹检测gankyrin对YAP诱导的EMT过程的EMT标志蛋白表达情况的影响；免疫组化检测肝癌患者肿瘤组织中YAP和gankyrin表达情况，确定二者的相关性及对患者生存期的影响。.重要结果及关键数据：.YAP蛋白在胆管癌细胞系和临床标本中都明显升高，其核定位与组织分型、TNM分期、远处转移和预后相关。在体内和体外沉默YAP可以明显抑制胆管癌的生长、侵袭以及增强其药物敏感性，而过表达YAP可以增强胆管癌的生长和侵袭。另外，我们发现YAP可以诱导胆管癌上皮间质化的发生，并且和IGF-1、P-AKT、Gankyrin形成一个阳性环路调控胆管癌的进展。我们在胆管癌患者标本中发现YAP和Gankyrin及P-AKT表达水平存在显著相关性，并且联合其中两者可以有效的提高预测的准确性。.科学意义：.YAP与IGF1、P-AKT和Gankyrin形成阳性反馈回路促进胆管癌的生长和侵袭。YAP是胆管癌的一个独立预后因素，为胆管癌的治疗提供一个新的途径。.