评价鳗弧菌减毒活疫苗体内免疫效力的新方法

本项目拟将斑马鱼这一遗传背景清楚，易于饲养，繁殖周期短的脊柱模式动物，应用于鳗弧菌减毒活疫苗生产的质量评判中。通过基因芯片技术，筛选斑马鱼对鳗弧菌减毒活疫苗免疫应答的主要效应因子，将其作为疫苗免疫效力分析的机体内分子指标，同时阐明分子指标与临床鱼种疫苗免疫效果的相关性，从而将其作为鳗弧菌减毒活疫苗未来生产中质量控制的主要标准之一，为解决水产动物细菌性疫苗生产中无标准实验动物、疫苗免疫效果分析周期长、可靠信弱等诸多问题提供新思路。

国内水产养殖鱼类品种繁多，本课题将遗传背景清楚的斑马鱼引入鳗弧菌减毒活疫苗免疫作用机制研究中，建立了包括抗体测定、免疫应答重要免疫因子转录水平分析的研究技术，证实了鳗弧菌减毒活疫苗浸泡免疫斑马鱼能激发包括特异性抗体在内的适应性免疫；基因芯片分析免疫28天斑马鱼脾脏组织转录组发现了2164个差异基因，系统分析中发现免疫的斑马鱼除了铁代谢和信号通路相关的基因发生显著变化外，B细胞和Th17细胞分化成熟相关的适应性免疫基因表达也发生了显著变化，而采用定量PCR法分析证实了浸泡接种35天内斑马鱼脾脏中Th17细胞激活、增殖和分化相关通路被显著激活；进一步浸泡和注射接种斑马鱼及免疫鱼抗感染过程中黏膜组织的Th17细胞相关免疫应答分析发现，IL17AF1-3、IL21和IL22、defesin-β1-3和CCL20基因表达均显著上调，且IL17AF2和IL22的表达在浸泡免疫的大菱鲆肠道和鳃中也显著上调，感染鳗弧菌毒株的免疫大菱鲆其黏膜组织中的表达也显著增加，从而确定了IL17AF2和IL22为鳗弧菌活疫苗浸泡免疫效力评价的分子指标，并建立了基于定量PCR技术的活疫苗浸泡免疫效力分析方法。同时研究中斑马鱼——临床鱼种的二级动物模型将有助于水产养殖鱼类疫苗作用机理的解析和疫苗学的评判。