LncRNA/miR-20a-5p靶向调节ATG7在神经母细胞瘤增殖中的作用及机制研究

Neuroblastoma (NB) is the most common extracranial solid pediatric tumor, with high malignancy and poor prognosis. Our preliminary exploration found that ATG7 was upregulated in NB tissue and promoted proliferation of NB cells, but the mechanism of ATG7 in NB proliferation and regulatory network remain unclear. Validated evidence showed that ATG7 might be the target of miR-20a-5p and LncRNAs (SNHG16, NORAD, Linc00839) possess binding sequence with miR-20a-5p. Thus we supposed that LncRNAs may function as ceRNAs for miR-20a-5p, promote abnormal proliferation of NB by regulating ATG7-mediated autophagy, enhance NB formation and malignant progression. Therefore, we propose to explore the effects of ATG7 and regulatory mechanism by LncRNA/miR-20a-5p in NB abnormal proliferation, and further verify the correlation between LncRNA-miR-20a-5p-ATG7 with the malignant degree of NB tumors in clinical samples (150 cases). By illustrating the mechanism of ATG7 in NB proliferation, this project may provide experimental evidence for clinical diagnosis and prognosis evaluation.

神经母细胞瘤（Neuroblastoma, NB）是儿童最常见的胚胎性颅外肿瘤，恶性程度高预后差。课题组前期研究发现自噬相关基因ATG7在NB肿瘤高表达并参与其异常增殖，但ATG7在NB肿瘤增殖中的作用以及受调控机制仍不清楚。我们前期工作证实miR-20a-5p可靶向调节ATG7，而且LncRNAs（SNHG16，NORAD，Linc00839）存在与miR-20a-5p结合的序列，提示LncRNAs可能作为ceRNA与miR-20a-5p竞争性结合，通过调控ATG7介导的自噬促进NB的异常增殖，增强NB成瘤能力，加快恶性进展。本课题拟深入研究LncRNAs/miR-20a-5p靶向调节ATG7在NB肿瘤增殖中的作用及分子机制，并进一步在儿童NB肿瘤样本（150例）中验证LncRNAs-miR-20a-5p-ATG7调节轴与NB肿瘤恶性度相关性，为NB临床诊治和预后评估提供实验依据。

儿童神经母细胞瘤（Neuroblastoma，NB）是儿童最常见的胚胎性颅外肿瘤，恶性度高、进展快，即使经过化疗，高危患儿的5年生存率仅为30%-50%，NB肿瘤的发病机制有待深入探索。肿瘤细胞自噬和肿瘤的发生发展密切相关，课题组前期证实自噬相关基因7（ATG7）在NB肿瘤组织高表达并且促进NB肿瘤细胞异常增殖，但ATG7及其介导的细胞自噬在儿童NB肿瘤进展中的作用以及调控ATG7的分子机制仍不清楚。本课题主要研究LncRNAs/miR-20a-5p靶向调节ATG7在NB肿瘤增殖中的作用及机制，并在儿童NB肿瘤样本中验证LncRNAs-miR-20a-5p-ATG7调节轴与NB肿瘤恶性度相关性。我们最终证实ATG7及其介导的自噬参与儿童NB肿瘤异常增殖，并且阐明了LncRNAs（SNHG16，NORAD，Linc00839）通过ceRNA的机制与miR-20a-5p竞争性结合调控ATG7；临床样本检测进一步证实 SNHG16、NORAD、Linc00839与NB肿瘤恶性度和预后密切相关，是NB肿瘤潜在的预后标志物。.最新研究发现TERT基因断裂可互补MYCN联合鉴别高危NB，有助于提高高危NB临床诊断及预后判断。在本课题资助下，我们研发了TERT基因断裂可视化FISH检测试剂盒，“一种用于检测TERT基因断裂的探针组、试剂盒及其应用”已申获国家专利（专利号：ZL201710419256.X）。研究团队对120例高危NB肿瘤样本检测发现，MYCN扩增阳性40例（约占33.3%），TERT断裂阳性14例（约占11.7%），两者联合诊断高危型NB从MYCN扩增单一阳性33%提高至MYCN扩增/TERT断裂阳性约45%左右（33.3%+11.7%=45%）。初步评估和验证了该试剂盒的可靠性和有效性。综上，我们的研究成果将为儿童NB肿瘤的靶向药物研发和预后评估提供实验证据和理论依据。