基于双链DNA电化学芯片的DNA结合蛋非标记检测方法的研究

将转录因子结合位点平均分成两个半位点。将其中一条半位点双链DNA探针通过分子自组装技术，固定到经过修饰的金电极表面，另一条半位点探针在其远DNA结合位置的一端标记一个电化学指示剂。当检测溶液中不存在目标蛋白时，两个半位点探针无法连接在一起，而当存在该蛋白时，在其序列特异性的识别及结合下，将2个半位点牢牢地抓在一起。蛋白质的结合过程通过电化学指示剂达到蛋白质的检测目的。双链DNA电化学芯片与细胞核提取物进行杂交反应，高灵敏度地检测大量转录因子在特定细胞中的表达及活化水平，用以阐明转录因子的表达与活化水平与细胞生理、病理变化的关系，以及结合基因芯片对细胞基因表达的检测，确定转录因子的调控基因，构建转录因子的基因表达调控网络，并用于筛选能够干扰基因转录调控的生物小分子。本课题研究在基础分子生物学、功能基因组学、蛋白质组及生物医药领域具有广泛的应用价值。