滨蒿黄酮类成分对流感病毒复制及宿主反应干预机制的研究

Earlier studies have shown that the general flavone of Artemisia mscoparia may inhibit influenza virus replication by acting on HA、NA、M2，and it Regulate the body's immune function too.For searching the interference system of Marina artemisia flavonoids on influenza virus replication and the host response,and explaining the material basis to play multiple target effect.The project group is going to prepare flavonoids compounds from the general flavone, further to select active ingredients from among them .These active ingredients will enter into mechanism research parallel with the general flavone，To observe the inhibition for influenza virus RNA replication,the effects to adsorption、penetration and release,the Influence on gene transcription ,and the effects on specific targets such as RNA polymerase 、NP etc . To determine the inflammatory factors in lungs and serum of influenza virus infective model in mice.By means of announcing the intervention mechanism of Artemisia scoparia flavonoids'double effect aim at "virus replication-host response ",and clarify curative materials ,in order to lay the foundation for candidate drug discovery.

本项目前期研究已证实滨蒿总黄酮部位可作用于HA、NA、M2蛋白三个靶点抑制流感病毒的复制，同时还可调节机体免疫功能，在此基础上，为进一步研究滨蒿黄酮类成分对流感病毒复制及宿主免疫应答的干预机制，并探寻其多靶点效应的物质基础，本项目拟从滨蒿总黄酮部位中分离筛选优效单体成分，与总黄酮部位平行观察对流感病毒RNA复制的抑制作用，对病毒吸附、穿入及释放三个阶段的影响，对流感病毒基因转录的影响，以及对RNA聚合酶、NP蛋白等特异性靶点的作用，探明其干预流感病毒复制的分子机制；测定样品对流感病毒感染小鼠模型肺组织及血清中多种炎性因子的影响，探讨其对病毒感染宿主免疫应答的调控机制。通过揭示滨蒿黄酮类成分针对流感发生过程中"病毒复制-宿主反应"发挥双重效应的抗病毒机制，确定效应物质，为发现新型抗流感候选药物奠定基础。

项目组在前期研究中已证实滨蒿总黄酮（ASE）具有明确的抗病毒作用，可多靶点抑制流感病毒复制，并调节机体的免疫功能。在此基础上，本项目又开展了ASE对病毒宿主免疫保护机制的研究，并对滨蒿中的单体成分及其抗病毒活性展开一系列研究，以发现有价值的先导化合物, 进而对其抗病毒分子机制进行研究和探讨。.ASE口服给药可改善流感病毒PR8感染小鼠肺部炎症，明显降低死亡率和延长生存期，其免疫保护机制为下调宿主肺组织和血清中IL-6、IL-8以及IFN-γ等炎性因子的高表达，从而减轻病毒感染引起的过度免疫应答所导致的机体炎性损伤。.通过色谱分析发现滨蒿中含有蓟黄素（CST）、槲皮素等多种黄酮类成分, 首次从滨蒿中分离出4′-羟基汉黄芩素，并得到4,5-二咖酰奎尼酸等酚酸类成分。活性测试表明上述单体成分大都具有抗流感病毒作用,其中黄酮类成分CST抗病毒活性最强。.CST显著抑制甲型流感病毒A/FortMonmouth/1/1947和达菲耐药株A/TianjinJinnan /15/2009，IC50分别为6.3 g /mL和5.8 g /mL；其抗病毒分子机制主要为抑制流感病毒RNA表达和跨膜蛋白M2的高表达，即通过抑制病毒遗传物质的合成和降低M2离子通道活性两种途径有效干扰流感病毒的复制。CST还明显抑制p65蛋白表达和COX-2蛋白表达，以及磷酸化p65的核转位，并下调细胞上清中IL-8, IL-10, IL-1β和TNF-α水平，提示可通过抑制细胞核内NF-κB的磷酸化而减少下游炎性因子的过表达。CST不但可有效抑制病毒复制，还可减轻宿主的免疫炎性反应,特别是对达菲耐药株也显示出较强的抑制活性，是一个研究价值很高的先导化合物。.课题组通过对滨蒿黄酮类成分的研究首次发现和报道了蓟黄素的抗病毒作用，并申请了发明专利。